problendoПроблемы ЭндокринологииProblems of Endocrinology0375-96602308-1430Endocrinology Research Centre10.14341/probl11311problendo-11311Research ArticleОригинальные исследованияOriginal StudiesВозможности использования свободно циркулирующей ДНК плазмы крови в дооперационной диагностике при новообразованиях щитовидной железыThe possibility of using freely circulating DNA blood plasma in preoperative diagnosis of thyroid tumorshttps://orcid.org/0000-0002-0617-7312КачкоВера АлександровнаKachkoVera A.

аспирант

postgraduate

VeraF246@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-6338-7490ВанушкоВладимир ЭдуардовичVanushkoVladimir E.

врач хирургического отделения, дмн, главный научный сотрудник

MD, PhD

vanushko@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-6388-1544ПлатоноваНадежда МихайловнаPlatonovaNadezhda M.

врач эндокринолог, дмн, главный научный сотрудник

MD, PhD

doc-platonova@inbox.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8284-9996АбросимовАлександр ЮрьевичAbrosimovAleksandr Yu.

Зав. отделением патоморфологии, дмн, главный научный сотрудник

MD, PhD

nikitarusskikh@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0370-8667ТелышеваЕкатерина НиколаевнаTely`shevaEkaterina N.

кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и цитогенетики

researcher

telisheva_k@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2584-802XСнигиреваГалина ПетровнаSnigirevaGalina P.

доктор биологических наук, заведующая лабораторией молекулярной биологии и цитогенетики

Dr, PhD

sni_gal@mail.ruПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова (Сеченовский университет)РоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University)Russian FederationНациональный медицинский исследовательский центр эндокринологииРоссияEndocrinology Research CentreRussian FederationПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова (Сеченовский университет); Национальный медицинский исследовательский центр эндокринологииРоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University); Endocrinology Research CentreRussian FederationРоссийский научный центр рентгенорадиологииРоссияRussian Research Center of RoentgenoradiologyRussian Federation201910062020656400407Copyright © Качко В.А., Ванушко В.Э., Платонова Н.М., Абросимов А.Ю., Телышева Е.Н., Снигирева Г.П., 20192019Качко В.А., Ванушко В.Э., Платонова Н.М., Абросимов А.Ю., Телышева Е.Н., Снигирева Г.П.Kachko V.A., Vanushko V.E., Platonova N.M., Abrosimov A.Y., Tely`sheva E.N., Snigireva G.P.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.probl-endojournals.ru/jour/article/view/11311Обоснование

Обоснование. Целесообразность использования молекулярно-генетических маркеров для диагностики новообразований щитовидной железы (ЩЖ) и прогнозирования течения рака щитовидной железы (РЩЖ) активно исследуется. Наибольший интерес представляют гены, мутации в которых ассоциированы не только с РЩЖ, но и с более агрессивным течением заболевания. Разработка и внедрение в практику методов определения молекулярно-генетических маркеров, основанных на исследовании свободно циркулирующей ДНК опухолевой ткани в плазме крови, является современным направлением медицины.

Цель

Цель: оценить встречаемость соматических мутаций в «горячих точках» генов BRAF, NRAS, EIF1AX и TERT в циркулирующей ДНК плазмы крови.

Методы

Методы. В исследование включено 153 пациента. Образцы ДНК, экстрагированной из удаленной опухолевой и неопухолевой ткани ЩЖ, тестировали на наличие соматических мутаций в «горячих точках» генов BRAF, KRAS, NRAS, EIF1AX и TERT, а далее при выявлении мутации тестировали соответствующие образцы свободно циркулирующей ДНК плазмы крови.

Результаты

Результаты. Мутации в «горячих точках» гена BRAF (экзон 15, район кодонов 600–601) были обнаружены в 54 случаях, мутации в «горячих точках» гена NRAS (экзон 3, кодон 61) – в 12 случаях; мутации в горячих точках генов KRAS, TERT и EIF1AX выявлены не были. В свободно циркулирующей ДНК плазмы крови мутации гена BRAF были выявлены в 1 случае, мутации гена NRAS были выявлены в 1 случае.

Заключение

Заключение. Использование свободно циркулирующей ДНК плазмы крови при тестировании исследованной выборки не показало целесообразности для диагностики новообразований щитовидной железы.

BACKGROUND

BACKGROUND. The feasibility of using molecular genetic markers for the diagnosis of thyroid tumors and the impact on the prognosis of thyroid cancer are being actively investigated. The most interesting are genes, the detection of which is associated not only with thyroid cancer, but also with a more aggressive course of the disease. The ability to diagnose the molecular profile of minimally invasive methods with the study of freely circulating DNA tumor tissue in blood plasma is a modern trend of medicine.

AIMS

AIMS: to evaluate the frequency of somatic mutations in the «hot spots» of BRAF, KRAS, KRAS, EIF1AX and TERT genes in circulating DNA of blood plasma.

MATERIALS AND METHODS

MATERIALS AND METHODS. Samples of DNA, extracted from the removed tumor and non-tumor thyroid tissue, were tested for the presence of somatic mutations in hot spots of the genes BRAF, KRAS, NRAS, TERT, and EIF1AX and then in identifying mutations and testing appropriate samples of free circulating DNA in blood plasma.

RESULTS

RESULTS. mutations in the» hot spots «of the BRAF gene (exon 15, codon area 600-601) were found in 54 patients, mutations in the» hot spots « of the NRAS gene (exon 3, codon 61) – in 12 patients; mutations in the hot spots of the KRAS, TERT and EIF1AX genes were not detected. In freely circulating blood plasma DNA, BRAF gene mutations were detected in 1 case, NRAS gene mutations were detected in 1 case.

CONCLUSIONS

CONCLUSIONS. the use of freely circulating DNA of blood plasma in the testing of the studied sample did not show the feasibility for the diagnosis of thyroid tumors.

новообразования щитовидной железырак щитовидной железысвободно циркулирующая ДНКмолекулярно-генетические исследованиямутациигорячие точкиBRAFKRASNRASEIF1AXTERTthyroid tumorsthyroid cancerfreely circulating DNAmolecular testingsomatic mutationshot spotsBRAFKRASNRASTERTEIF1AXReferencesБельцевич Д.Г., Ванушко В.Э., Румянцев П.О. и др. Российские клинические рекомендации по диагностике и лечению высокодифференцированного рака щитовидной железы у взрослых, 2017 год. // Эндокринная хирургия. – 2017. – Т. 11. – №1. – С. 6–27. doi: 10.14341/serg201716-27. [Beltsevich DG, Vanushko VE, Rumyantsev PO, et al. 2017 Russian clinical practice guidelines for differentiated thyroid cancer diagnosis and treatment. Endocrine Surgery. 2017;11(1):6 -27. doi: 10.14341/serg201716 -27.(In Russ).]Бельцевич Д.Г., Ванушко В.Э., Румянцев П.О. и др. Российские клинические рекомендации по диагностике и лечению высокодифференцированного рака щитовидной железы у взрослых, 2017 год. // Эндокринная хирургия. – 2017. – Т. 11. – №1. – С. 6–27. doi: 10.14341/serg201716-27. [Beltsevich DG, Vanushko VE, Rumyantsev PO, et al. 2017 Russian clinical practice guidelines for differentiated thyroid cancer diagnosis and treatment. Endocrine Surgery. 2017;11(1):6 -27. doi: 10.14341/serg201716 -27.(In Russ).]Ma M, Zhu H, Zhang C, Sun X, Gao X, Chen G. “Liquid biopsy” – ctDNA detection with great potential and challenges. Ann Transl Med. 2015 Sep; 3 (16): 235. DOI: 10.3978/j.issn.2305-5839.2015.09.29.Ma M, Zhu H, Zhang C, Sun X, Gao X, Chen G. “Liquid biopsy” – ctDNA detection with great potential and challenges. Ann Transl Med. 2015 Sep; 3 (16): 235. DOI: 10.3978/j.issn.2305-5839.2015.09.29.Diaz LA Jr, Bardelli A. Liquid Biopsies: Genotyping Circulating Tumor DNA. J Clin Oncol. 2014 Feb 20; 32 (6): 579–86. DOI: 10.1200/JCO.2012.45.2011.Diaz LA Jr, Bardelli A. Liquid Biopsies: Genotyping Circulating Tumor DNA. J Clin Oncol. 2014 Feb 20; 32 (6): 579–86. DOI: 10.1200/JCO.2012.45.2011.Beije N, Helmijr JC, Weerts MJA, Beaufort CM, Wiggin M, Marziali A et al. Somatic mutation detection using various targeted detection assays in paired samples of circulating tumor DNA, primary tumor and metastases from patients undergoing resection of colorectal liver metastases. Mol Oncol. 2016 Dec; 10 (10): 1575–84. DOI: 10.1016/j.molonc.2016.10.001.Beije N, Helmijr JC, Weerts MJA, Beaufort CM, Wiggin M, Marziali A et al. Somatic mutation detection using various targeted detection assays in paired samples of circulating tumor DNA, primary tumor and metastases from patients undergoing resection of colorectal liver metastases. Mol Oncol. 2016 Dec; 10 (10): 1575–84. DOI: 10.1016/j.molonc.2016.10.001.Захаренко А. А., Зайцев Д. А., Беляев М. А., Трушин А. А., Тен О. А., Натха А. С. Возможности жидкой биопсии при раке желудка. Вопросы онкологии. 2016; 62 (4): 379–85.Захаренко А. А., Зайцев Д. А., Беляев М. А., Трушин А. А., Тен О. А., Натха А. С. Возможности жидкой биопсии при раке желудка. Вопросы онкологии. 2016; 62 (4): 379–85.Тамкович С. Н., Власов В. В., Лактионов П. П. Циркулирующие ДНК крови и их использование в медицинской диагностике. Молекулярная биология. 2008; 42 (1): 12–23.Тамкович С. Н., Власов В. В., Лактионов П. П. Циркулирующие ДНК крови и их использование в медицинской диагностике. Молекулярная биология. 2008; 42 (1): 12–23.Васильева И. Н., Беспалов В. Г. Роль внеклеточной ДНК в возникновении и развитии злокачественных опухолей и возможности ее использования в диагностике и лечении онкологических заболеваний. Вопросы онкологии. 2013; 59 (6): 673–81.Васильева И. Н., Беспалов В. Г. Роль внеклеточной ДНК в возникновении и развитии злокачественных опухолей и возможности ее использования в диагностике и лечении онкологических заболеваний. Вопросы онкологии. 2013; 59 (6): 673–81.Diehl F, Schmidt K, Choti MA, Romans K, Goodman S, Li M et al. Circulating mutant DNA to assess tumor dynamics. Nat Med. 2008 Sep; 14 (9): 985–90. DOI: 10.1038/nm.1789.Diehl F, Schmidt K, Choti MA, Romans K, Goodman S, Li M et al. Circulating mutant DNA to assess tumor dynamics. Nat Med. 2008 Sep; 14 (9): 985–90. DOI: 10.1038/nm.1789.Holdhoff M, Schmidt K, Donehower R, Diaz LA. Analysis of circulating tumor DNA to confirm somatic KRAS mutations. J Natl Canc Inst. 2009; 101 (18): 1284-–5. DOI: 10.1093/jnci/djp240.Holdhoff M, Schmidt K, Donehower R, Diaz LA. Analysis of circulating tumor DNA to confirm somatic KRAS mutations. J Natl Canc Inst. 2009; 101 (18): 1284-–5. DOI: 10.1093/jnci/djp240.Chen KZ, Lou F, Yang F, Zhang JB, Ye H, Chen W et al. Circulating tumor DNA detection in early-stage non-small cell-lung cancer patients by targeted sequencing. Sci Rep. 2016 Aug 24; 6: 31985. DOI: 10.1038/srep31985.Chen KZ, Lou F, Yang F, Zhang JB, Ye H, Chen W et al. Circulating tumor DNA detection in early-stage non-small cell-lung cancer patients by targeted sequencing. Sci Rep. 2016 Aug 24; 6: 31985. DOI: 10.1038/srep31985.Rachiglio AM, Abate RE, Sacco A, Pasquale R, Fenizia F, Lambiase M et al. Limits and potential of targeted sequencing analysis of liquid biopsy in patients with lung and colon carcinoma. Oncotarget. 2016 Oct 11; 7 (41): 66595–605. DOI: 10.18632/oncotarget.10704.Rachiglio AM, Abate RE, Sacco A, Pasquale R, Fenizia F, Lambiase M et al. Limits and potential of targeted sequencing analysis of liquid biopsy in patients with lung and colon carcinoma. Oncotarget. 2016 Oct 11; 7 (41): 66595–605. DOI: 10.18632/oncotarget.10704.Tu M, Chia D, Wei F, Wong D. Liquid biopsy for etection of actionable oncogenic mutations in human cancers and electric field induced release and measurement liquid biopsy (eLB). Analyst. 2016 Jan 4; 141 (2): 393–402. DOI: 10.1039/c5an01863c.Tu M, Chia D, Wei F, Wong D. Liquid biopsy for etection of actionable oncogenic mutations in human cancers and electric field induced release and measurement liquid biopsy (eLB). Analyst. 2016 Jan 4; 141 (2): 393–402. DOI: 10.1039/c5an01863c.Белоусова А. В., Дрозд О. В., Зарецкий А. Р. Мутационно-специфическая полимеразная цепная реакция для анализа мутаций в «горячих точках» генов K-Ras и B-Raf в биологических образцах онкологических больных. В сб.: Тезисы конференции «Современные принципы диагностики и лечения колоректального рака», посвященной памяти проф. В. И. Кныша; 26–27 мая 2011 г.; Москва. М.: 2011. с. 16.Белоусова А. В., Дрозд О. В., Зарецкий А. Р. Мутационно-специфическая полимеразная цепная реакция для анализа мутаций в «горячих точках» генов K-Ras и B-Raf в биологических образцах онкологических больных. В сб.: Тезисы конференции «Современные принципы диагностики и лечения колоректального рака», посвященной памяти проф. В. И. Кныша; 26–27 мая 2011 г.; Москва. М.: 2011. с. 16.Е. Н. Телышева, Г. П. Снигирева. Аназиз соматических мутаций в генах Ras- каскада свободно циркулирующей ДНК плазмы крови пациентов с колоректальным раком методом усиленной аллель-специфической ПЦР в «реальном времени»..Вестник РГМУ 2017; 4: 14-20Е. Н. Телышева, Г. П. Снигирева. Аназиз соматических мутаций в генах Ras- каскада свободно циркулирующей ДНК плазмы крови пациентов с колоректальным раком методом усиленной аллель-специфической ПЦР в «реальном времени»..Вестник РГМУ 2017; 4: 14-20Качко В.А., Семкина Г.В., Абросимов А.Ю. и др. Диагностика новообразований щитовидной железы Эндокринная хирургия, 2018, том 12, №3, С.109-127 [Kachko VA, Semkina GV, Abrosimov AY, Platonova NM, Vanushko VE. Diagnosis of thyroid neoplasms: state of the art on 2018. Endocrine Surgery. 2018;12(3):109-127. doi: https://doi.org/10.14341/serg9977 (In Russ).]Качко В.А., Семкина Г.В., Абросимов А.Ю. и др. Диагностика новообразований щитовидной железы Эндокринная хирургия, 2018, том 12, №3, С.109-127 [Kachko VA, Semkina GV, Abrosimov AY, Platonova NM, Vanushko VE. Diagnosis of thyroid neoplasms: state of the art on 2018. Endocrine Surgery. 2018;12(3):109-127. doi: https://doi.org/10.14341/serg9977 (In Russ).]Xing M. Molecular pathogenesis and mechanisms of thyroid cancer. Nat Rev Cancer. 2013;13(3):184-199. doi: 10.1038/nrc3431.Xing M. Molecular pathogenesis and mechanisms of thyroid cancer. Nat Rev Cancer. 2013;13(3):184-199. doi: 10.1038/nrc3431.Younis E. Oncogenesis of Thyroid Cancer. Asian Pac J Cancer Prev. 2017;18(5):1191–1199. Published . doi:10.22034/APJCP.2017.18.5.1191Younis E. Oncogenesis of Thyroid Cancer. Asian Pac J Cancer Prev. 2017;18(5):1191–1199. Published . doi:10.22034/APJCP.2017.18.5.1191Tufano RP, Teixeira GV, Bishop J, Carson KA, Xing M. BRAF mutation in papillary thyroid cancer and its value in tailoring initial treatment: a systematic review and meta-analysis. Medicine (Baltimore) 2012;91:274–286.Tufano RP, Teixeira GV, Bishop J, Carson KA, Xing M. BRAF mutation in papillary thyroid cancer and its value in tailoring initial treatment: a systematic review and meta-analysis. Medicine (Baltimore) 2012;91:274–286.Xing M, Alzahrani AS, Carson KA, Viola D, Elisei R, Bendlova B, Yip L, Mian C, Vianello F, Tuttle RM, et al. Association between BRAF V600E mutation and mortality in patients with papillary thyroid cancer. Jama. 2013; 309:1493–1501.Xing M, Alzahrani AS, Carson KA, Viola D, Elisei R, Bendlova B, Yip L, Mian C, Vianello F, Tuttle RM, et al. Association between BRAF V600E mutation and mortality in patients with papillary thyroid cancer. Jama. 2013; 309:1493–1501.Howell GM, Hodak SP, Yip L. RAS mutations in thyroid cancer. Oncologist. 2013;18(8):926-32.Howell GM, Hodak SP, Yip L. RAS mutations in thyroid cancer. Oncologist. 2013;18(8):926-32.Gandolfi G., Ragazzi M., Frasoldati A., Piana S., Ciarrocchi A., Sancisi V. TERT promoter mutations are associated with distant metastases in papillary thyroid carcinoma. Eur. J. Endocrinol. 2015;172:403–413. doi: 10.1530/EJE-14-0837.Gandolfi G., Ragazzi M., Frasoldati A., Piana S., Ciarrocchi A., Sancisi V. TERT promoter mutations are associated with distant metastases in papillary thyroid carcinoma. Eur. J. Endocrinol. 2015;172:403–413. doi: 10.1530/EJE-14-0837.Liu X., Qu S., Liu R., Sheng C., Shi X., Zhu G., Murugan A.K., Guan H., Yu H., Wang Y., et al. TERT promoter mutations and their association with BRAF V600E mutation and aggressive clinicopathological characteristics of thyroid cancer. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2014;99:E1130–E1136. doi: 10.1210/jc.2013-4048.Liu X., Qu S., Liu R., Sheng C., Shi X., Zhu G., Murugan A.K., Guan H., Yu H., Wang Y., et al. TERT promoter mutations and their association with BRAF V600E mutation and aggressive clinicopathological characteristics of thyroid cancer. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2014;99:E1130–E1136. doi: 10.1210/jc.2013-4048.Liu, T., Yuan, X., & Xu, D. Cancer-Specific Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Promoter Mutations: Biological and Clinical Implications. Genes,2016; 7(7), 38. doi:10.3390/genes7070038.Liu, T., Yuan, X., & Xu, D. Cancer-Specific Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Promoter Mutations: Biological and Clinical Implications. Genes,2016; 7(7), 38. doi:10.3390/genes7070038.Liu X, Bishop J, Shan Y, Pai S, Liu D, Murugan AK, Sun H, El-Naggar AK, Xing M. Highly prevalent TERT promoter mutations in aggressive thyroid cancers. Endocrine-Related Cancer. 2013; 20:603–610. [PubMed: 23766237Liu X, Bishop J, Shan Y, Pai S, Liu D, Murugan AK, Sun H, El-Naggar AK, Xing M. Highly prevalent TERT promoter mutations in aggressive thyroid cancers. Endocrine-Related Cancer. 2013; 20:603–610. [PubMed: 23766237Liu R. and Xing M., TERT Promoter Mutations in Thyroid Cancer Endocr Relat Cancer. 2016 March ; 23(3): R143–R155. doi:10.1530/ERC-15-0533.]Liu R. and Xing M., TERT Promoter Mutations in Thyroid Cancer Endocr Relat Cancer. 2016 March ; 23(3): R143–R155. doi:10.1530/ERC-15-0533.]Jin A., Xu J., Wang Y..The role of TERT promoter mutations in postoperative and preoperative diagnosis and prognosis in thyroid cancer. Medicine (Baltimore). 2018 Jul;97(29):e11548. doi: 10.1097/MD.0000000000011548.Jin A., Xu J., Wang Y..The role of TERT promoter mutations in postoperative and preoperative diagnosis and prognosis in thyroid cancer. Medicine (Baltimore). 2018 Jul;97(29):e11548. doi: 10.1097/MD.0000000000011548.Abdullah MI, Junit SM, Ng KL, et all. Papillary Thyroid Cancer: Genetic Alterations and Molecular Biomarker Investigations. Int J Med Sci. 2019;16(3):450–460. Published 2019 Feb 28. doi:10.7150/ijms.29935Abdullah MI, Junit SM, Ng KL, et all. Papillary Thyroid Cancer: Genetic Alterations and Molecular Biomarker Investigations. Int J Med Sci. 2019;16(3):450–460. Published 2019 Feb 28. doi:10.7150/ijms.29935Karunamurthy A, Panebianco F, J Hsiao S, et al. Prevalence and phenotypic correlations of EIF1AX mutations in thyroid nodules. Endocr Relat Cancer. 2016;23(4):295-301. doi:10.1530/ERC-16-0043Karunamurthy A, Panebianco F, J Hsiao S, et al. Prevalence and phenotypic correlations of EIF1AX mutations in thyroid nodules. Endocr Relat Cancer. 2016;23(4):295-301. doi:10.1530/ERC-16-0043Качко В.А., Зарецкий А.Р., Ванушко В.Э., и др. Тестирование соматических мутаций: роль в дифференциальной диагностике новообразований щитовидной железы. Эндокринная хирургия, 2019, Т. 13, №1, С.26-41. doi: https://doi.org/10.14341/serg10181 [Kachko VA, Zaretsky AR, Vanushko VE, Platonova NM, Abrosimov AYu, Semkina GV Somatic mutation testing: the role in differential diagnosis of thyroid neoplasms. Endocrine Surgery. 2019;13(1):26 -41. doi: https://doi.org/10.14341/serg10181 (In Russ).]Качко В.А., Зарецкий А.Р., Ванушко В.Э., и др. Тестирование соматических мутаций: роль в дифференциальной диагностике новообразований щитовидной железы. Эндокринная хирургия, 2019, Т. 13, №1, С.26-41. doi: https://doi.org/10.14341/serg10181 [Kachko VA, Zaretsky AR, Vanushko VE, Platonova NM, Abrosimov AYu, Semkina GV Somatic mutation testing: the role in differential diagnosis of thyroid neoplasms. Endocrine Surgery. 2019;13(1):26 -41. doi: https://doi.org/10.14341/serg10181 (In Russ).]Качко В.А., Ванушко В.Э., Платонова Н.М. Прогностическое значение тестирования соматических мутаций и различных методов лечения при высокодифференцированном раке щитовидной железы низкого риска Эндокринная хирургия, 2019, Т. 13, №2 doi:https://doi.org/10.14341/serg10220 [Kachko VA, Vanushko VE, Platonova NM. Prognostic value of somatic mutation testing and different methods of treatment of low -risk differentiated thyroid cancer. Endocrine surgery. 2019;13(2). doi: https://doi.org/10.14341/serg10220. (In Russ).]Качко В.А., Ванушко В.Э., Платонова Н.М. Прогностическое значение тестирования соматических мутаций и различных методов лечения при высокодифференцированном раке щитовидной железы низкого риска Эндокринная хирургия, 2019, Т. 13, №2 doi:https://doi.org/10.14341/serg10220 [Kachko VA, Vanushko VE, Platonova NM. Prognostic value of somatic mutation testing and different methods of treatment of low -risk differentiated thyroid cancer. Endocrine surgery. 2019;13(2). doi: https://doi.org/10.14341/serg10220. (In Russ).]COSMIC [Internet]. Catalogue of Somatic Mutations In Cancer [cited 2018 Dec 12]. Available from: https://cancer.sanger.ac.uk/cosmicCOSMIC [Internet]. Catalogue of Somatic Mutations In Cancer [cited 2018 Dec 12]. Available from: https://cancer.sanger.ac.uk/cosmicEnsEMBL [Internet]. Genome browser [cited 2018 Dec 12]. Available from: http://www.ensembl.orgEnsEMBL [Internet]. Genome browser [cited 2018 Dec 12]. Available from: http://www.ensembl.org

The authors declare that there are no conflicts of interest present.