Цель данного исследования состояла в изучении показателей клеточного и гуморального иммунитета у детей и подростков с разной продолжительностью инсулинзависимого сахарного диабета (ИЗСД). В связи с этим обследовано 55 детей и подростков с ИЗСД, которых по длительности заболевания разделили на 3 группы: болеющие ИЗСД до 1 года, 1—5 лет и более 5 лет. С помощью метода непрямой иммунофлюоресценции исследован популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови. Концентрацию основных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии. Доказано, что на стадии начального диабета у больных детей и подростков состояние системы иммунореактивности выражается в депрессии Т-клеточного звена иммунной системы и активации гуморального иммунитета. С увеличением продолжительности заболевания депрессия клеточного звена становится более выраженной. У больных ИЗСД независимо от продолжительности заболевания отмечается увеличение концентрации в крови CD 16+-клеток. Содержание НLA-DR -лимфоцитов, повышенное на стадии начального диабета, в более поздний период ИЗСД снижается до диапазона нормы. В наблюдаемый период заболевания не установлено определенной динамики изменения концентраций сывороточных иммуноглобулинов, однако в разные периоды ИЗСД уровни IgA и IgM достоверно увеличены.
Cellular and humoral immunity parameters were studied in 55 children and adolescents with insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM). The patients were divided into 3 groups with different duration of disease: up to I year, 1-5 years, and more than 5 years. Population and subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes was studied by indirect immunofluorescence. Serum concentrations of the main immunoglobulin classes were measured by radial immunodiffusion. At the initial stage of diabetes the immunoreactivity status in children and adolescents manifested by depression of T-cellular component of the immune system and activation of humoral immunity, this depression progressing with disease. The concentration of CD16+ cells was increased in all patients, irrespective of disease duration. 'The content of HLA-DR+ lymphocytes was increased at the stage of initial diabetes and decreased to the norm later. No definite patterns in changes of serum immunoglobulin concentrations could be distinguished during the observed period of disease; however the levels of IgA and IgM were significantly increased during various periods of IDDM.
Инсулинзависимый сахарный диабет (ИЗСД) является одним из наиболее распространенных эндокринных заболеваний в детском возрасте. Из-за сложности компенсации и лабильности течения в детском и подростковом возрасте происходит раннее развитие осложнений, приводящих в последующем к инвалидизации больных. Поданным литературы, ежегодно число больных увеличивается на 5—7%, а каждые 12—15 лет удваивается [
Вместе с тем в литературе имеются достаточно противоречивые данные о роли клеточного звена иммунной системы в этиологии и патогенезе ИЗСД. В большинстве случаев на всех этапах заболевания выявляются дисбаланс субпопуляций Тлимфоцитов, а также изменение их функциональной активности [5, 7). В связи с этим в лечении ИЗСД все чаще стали рассматривать возможность применения иммунотропных средств [4, 9]. Однако для успешного применения иммуномодуляторов необходимы знания состояния параметров иммунной системы не только при впервые выявленном заболевании, но и в динамике патологического процесса. Целью данного исследования явилось изучение показателей клеточного и гуморального иммунитета у детей и подростков с разной продолжительностью ИЗСД.
Обследовано 55 детей и подростков Красноярского края в возрасте от 7 до 17 лет, больных ИЗСД (28 девочек и 27 мальчиков). Средний возраст больных детей составил 11,6 ±0,31 года. Контрольная группа состояла из 21 здорового ребенка того же возраста. По длительности заболевания пациентов разделили на 3 группы: 1-я — длительность заболевания до 1 года (23 ребенка), 2-я — от 1 года до 5 лет (18 детей), 3-я — более 5 лет (14 детей). Степень компенсации оценивали по уровню гликемии и гликозилированного гемоглобина (НЬ А|С). В 1-й группе 10% детей находились в стадии компенсации, 20% — субкомпенсации и 70% — в стадии декомпенсации, во 2-й группе — 25, 13 и 62%, в 3-й группе — 23, 23 и 54% соответственно. Все дети получали человеческий инсулин в дозе от 0,32 до 1,45 ЕД/кг по интенсифицированной схеме.
Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов крови оценивали с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител к CD3, CD4, CD8, CD16, CD19, CD21, HLA-DR. Концентрацию иммуноглобулинов классов А, М и G в сыворотке определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини [
Анализ исследуемых параметров иммунной системы позволяет констатировать, что изменения в иммунном статусе у детей и подростков с ИЗСД зависят от продолжительности заболевания. Так, процентное содержание СОЗ+-лимфоцитов, статистически достоверно сниженное в группе детей и подростков с продолжительностью ИЗСД 1—12 мес, продолжает снижаться в зависимости от длительности заболевания (табл. 1). Соответственно уже в 1-й год заболевания отмечается повышение соотношения лейкоциты/СОЗ+, которое и далее увеличивается с продолжительностью ИЗСД. У обследуемых с продолжительностью ИЗСД 1—12 мес возрастает относительное содержание СО4+-клеток, снижающееся с увеличением продолжительности заболевания. Подобная зависимость от длительности ИЗСД выявляется и по содержанию HLA-DR+-клеток.
Таблица 1
Показатели клеточного иммунитета у детей и подростков с разной продолжительностью ИЗСД (X ± т)
| Показатель | Здоровые (л = 21) (1) | Продолжительность ИЗСД | ||
| 1 — 12 мес (л = 23) (2) | 1-5 лет (л = 18) (3) | более 5 лет (л = 14) (4) | ||
| Лейкоциты. 109/л | 6,16 ± 0,52 | 6.43 ± 0,41 | 6,78 ± 0,43 | 7,20 ± 0.64 |
| Лимфоциты, % | 45,1 ± 2,7 | 42,7 ± 1,9 | 34,7 ± 2,3 Д|.2 < 0,01 | 42.6 ± 2.2 Рз < 0,05 |
| Лимфоциты, 109/л | 2,70 ± 0,25 | 2.57 ±0,15 | 2,33 ± 0,19 | 2.98 ± 0.23 р3 < 0.05 |
| CD3+, % | 63,4 ± 2,2 | 56,0 ± 2,8 Р\ < 0,05 | 49.9 ± 3.7 Р\ < 0,01 | 44,5 ± 3,6 Pt < 0,001 Р2 < 0,05 |
| CD3+, 109/л | 1,71 ± 0,17 | 1,56 ± 0,13 | 1,20 ± 0,15 Pt < 0,05 0,1 > Р2> 0.05 | 1.28 ± 0,17 0,1 > р{ > 0,05 |
| CD4+, % | 37,5 ± 2,0 | 45,0 ± 3,4 0,1 > р, > 0,05 | 44,3 ± 3,9 | 33,4 ± 3,1 Р2. 3 < 0,05 |
| CD4+, 109/л | 1,04 ± 0,12 | 1,25 ± 0,13 | 1.01 ± 0,13 | 1.02 ± 0,18 |
| CD8+, % | 26,4 ± 1,5 | 29,7 ± 3,5 | 29,1 ± 3,3 | 30,1 ± 3,3 |
| CD8+, 109/л | 0,74 ± 0.09 | 0,87 ± 0,14 | 0,71 ± 0,10 | 0,92 ± 0,14 |
| CD16+, % | 16,1 ± 1,3 | 23,9 ± 2,6 Pt < 0.05 | 21,5 ± 3,1 0,1 > р\ > 0,05 | 25,2 ± 4,1 Р\ < 0.05 |
| CD16+, 109/л | 0,39 ± 0.04 | 0.58 ± 0,06 Pt < 0,05 | 0,52 ±0,11 | 0.70 ±0,12 Pt < 0,01 |
| HLA-DR+, % | 17,2 ± 0.9 | 23,5 ± 2,1 Pt < 0,05 | 22,4 ± 2,2 Pt < 0,05 | 19,6 ± 2,9 |
| HLA-DR+, 109/л | 0,47 ± 0,05 | 0,64 ± 0,06 Pt < 0,05 | 0,52 ± 0,07 | 0,49 ± 0,05 0,1 > р2> 0,05 |
| CD4+/CD8+ | 1,44 ± 0.09 | 1,53 ± 0,16 | 1,40 ± 0,13 | 1,29 ± 0,13 |
| Лейкоииты/СОЗ+ | 3,65 ± 0,23 | 4,29 ± 0,26 0.1 > р\ > 0,05 | 6,75 ± 0,67 Pl. 2 < 0,001 | 6,13 ± 0,66 Р1.2 < 0,01 |
Таблица 2
Показатели гуморального иммунитета у детей и подростков с разной продолжительностью ИЗСД (X ± т)
| Показатель | Здоровые (п = 21) (1) | Продолжительность ИЗСД | ||
| 1-12 мес (п = 23) (2) | 1-5 лет (л= 18) (3) | более 5 лет (л = 14) (4) | ||
| CD19+, % | 19,1 ± 2,2 | 27,8 ± 2,2 /?, < 0,01 | 21,6 ± 2,3 0,1 > Р2 > 0,05 | 18,6 ± 2,5 Р2 < 0,01 |
| CDI9+, 109/л | 0,52 ± 0,09 | 0,77 ± 0,08 Pl < 0,05 | 0,46 ± 0,05 р2 < 0,01 | 0.47 ± 0,04 Р2 < 0,01 |
| Лейкоциты/CD 19+ | 16,39 ± 2,14 | 9,08 ± 0,90 pt < 0,01 | 16,02 ± 1,72 р2 < 0,001 | 16,38 ±1,99 Р2 < 0,001 |
| IgA, г/л | 1,73 ± 0,21 | 2,79 ± 0,35 Pt < 0,05 | 2,26 ± 0,42 | 3,11 ± 0,44 Pl < 0,01 |
| IgM, г/л | 1,45 ± 0,21 | 1,71 ± 0,23 | 2,91 ± 0,70 Pt < 0,05 0,1 > Р2 > 0,05 | 2,03 ± 0,49 |
| IgG, г/л | 12,30 ± 1,88 | 10.84 ± 0,90 | 12,68 ± 1,79 | 9,04 ± 0,58 0,1 > р} > 0,05 |
| lgA/CD19+, нг/кпетка | 4,72 ± 0,71 | 4,64 ± 0,96 | 3,01 ± 0,74 0,1 > р\ > 0,05 | 6,17 ± 1,37 р3 < 0,05 |
| lgM/CD!9+, нг/клетка | 4,20 ± 0,84 | 2,98 ± 0,88 | 4,51 ± 0,88 | 4,50 ± 1,65 |
| lgG/CD!9+, нг/клетка | 33,94 ± 4,96 | 18,49 ±3,12 Pt < 0,01 | 28,21 ± 4,29 0,1 > Р2 > 0,05 | 19,71 ± 3,26 Pt < 0,05 |
Следовательно, у детей и подростков с ИЗСД обнаружена депрессия Т-клеточного звена иммунной системы, проявляющаяся уже в период начального диабета и повышающаяся с увеличением продолжительности заболевания. Существование данной зависимости подтверждается результатом корреляционного анализа: продолжительность ИЗСД отрицательно взаимосвязана с относительным содержанием СОЗ+-клеток (г = —0,39; р < 0,01) и положительно — с лейко-Т-клеточным индексом (г= 0,28; р < 0,05). В то же время в течение всего обследуемого периода заболевания отмечается повышенная концентрация СО16+-лимфоцитов.
У детей и подростков с ИЗСД обнаружены также значительные изменения и показателей гуморального иммунитета (табл. 2). На 1-м году заболевания возрастает, а затем с увеличением продолжительности заболевания снижается до диапазона нормы концентрация СО19+-лимфоцитов. В связи с этим в начальный период заболевания установлено снижение лейко-В-клеточного индекса, который уже в период 1—5 лет ИЗСД достигает диапазона нормы. Содержание IgA возрастает в периоды заболевания 1 — 12 мес и более 5 лет. Концентрация IgM достигает максимума в 1—5 лет ИЗСД с возвращением в диапазон нормы в более позднем периоде заболевания. В обратной зависимости относительно данного параметра изменяется уровень выработки Влимфоцитами IgA (IgA/CD19+): в период 1—5 лет заболевания наблюдается минимум с увеличением в дальнейшем этого соотношения. Уровень синтеза В-клетками IgG имеет 2 статистически достоверных минимума в диапазоне исследуемого периода ИЗСД: в 1 — 12 мес и при заболевании длительностью более 5 лет. Следовательно, в период начального диабета у детей и подростков отмечается активация гуморального звена иммунной системы. Однако с увеличением продолжительности заболевания уровень реактивности гуморального иммунитета возвращается в диапазон нормы, что также подтверждается результатами корреляционного анализа: продолжительность ИЗСД отрицательно коррелирует с относительной и абсолютной концентрацией В-лимфоцитов (/•= —0,48; р < 0,001 и г=-0,42;р< 0,01).
Таким образом, у детей и подростков с ИЗСД в течение 1-го года заболевания отмечаются депрессия Т-клеточного и активация гуморального иммунитета. В этот же период установлено повышенное содержание HLA-DR+-icneTOK. С увеличением продолжительности ИЗСД наблюдается снижение концентрации Ви НЬА-ОК+-лимфоцитов до диапазона нормы и дальнейшее увеличение депрессии клеточного звена иммунитета.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.