Целью работы явились сравнительное исследование показателей иммунного статуса (Т-лимфоцитов с маркерами CD4\ CD8+, CD95+ и циркулирующих иммунных комплексов с IgM) и состояния микрососудов конъюнктивы глазного яблока у больных с ангиографически документированным коронарным атеросклерозом в сочетании с абдоминальным ожирением и атерогенной дислипидемией и у больных ишемической болезнью сердца (ИБС) без ожирения и дислипидемии, а также поиск связей между иммунологическими и метаболическими показателями. Субпопуляции Т-лимфоцитов определяли методом непрямой иммунопероксидазной реакции с использованием моноклональных антител. У больных ИБС с ожирением и дислипидемией выявлены высокие уровни цитотоксических лимфоцитов (CDTF) и Т-клеток с молекулой Fas, достоверно отличающиеся от соответствующих показателей в группе больных ИБС без ожирения. Концентрация циркулирующих иммунных комплексов с IgM была самой высокой у больных ИБС с ожирением и дислипидемией, что может способствовать повреждению микрососудов. Результаты биомикроскопии сосудов конъюнктивы выявили более выраженные нарушения микроциркуляции у больных ИБС с ожирением и гиперлипидемией, о чем свидетельствует достоверное повышение конъюнктивальных индексов в этой группе по сравнению с группой ИБС без ожирения и нарушений липидного спектра. Обнаружены статистически значимые корреляционные связи между маркером CD95* и индексом массы тела, показателями липидного обмена атерогенной направленности и креатинфосфокиназой. Предполагается, что аномальная активация Fas-системы может участвовать в патогенезе ишемических повреждений различных органов или в опосредованных цитотоксическими лимфоцитами аутоиммунных процессах.
Immunity parameters (Т lymphocytes with CD4\ CDS*, CD95+ markers and circulating immune complexes (CIC) with IgM) and the eyeball conjunctival vessels were studied in patients with angiographically documented coronary atherosclerosis with and without metabolic syndrome (MS) with the aim of detecting a relationship between immunological and metabolic parameters. T lymphocyte subpopulations were evaluated by indirect immunoperoxidase test with monoclonal antibodies. High levels of cytotoxic lymphocytes (CDS*) and T cells with Fas molecule were detected in coronary patients with MS, but not in coronary patients without MS. The concentration of CIC with IgM was the highest in patients with MS, which may be conducive to capillary damage. Biomicroscopy of conjunctival vessels detected more pronounced disorders in microcirculation in coronary patients with MS, presenting as a significant increase in the conjunctival indexes in this group in comparison with coronary patients without MS. Statistically significant correlations were detected between CD95* marker and body weight index, atherogenic lipid metabolism parameters, and creatine phosphokinase levels. Abnormal activation of Fas system may be involved in the pathogenesis of ischemic injuries to various organs or in autoimmune processes mediated by cytotoxic lymphocytes.
С начала 70-х годов предположению о возможном вовлечении иммунологических механизмов в патогенез атеросклероза придается особое значение. Представляется, что оба (гуморальный и клеточный) механизма участвуют в начале развития и прогрессировании атеросклеротического повреждения. Найдено 2 различных иммунологических пути, ведущих к атеросклерозу: аутоиммунный ответ на окисленные липопротеиды низкой плотности (ЛПНП) и аутоиммунный ответ на белки теплового шока [
Многими исследованиями доказано, что факторами риска для атерогенеза являются компоненты метаболического синдрома, включающие в себя присутствие маленьких плотных ЛПНП, высокие уровни триглицеридов и низкие уровни липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), абдоминальное ожирение, которое ассоциируется с резистентностью к инсулину и артериальной гипертензией [3, 4, 9]. Исходя из вышеизложенного, можно ожидать более выраженных изменений иммунного статуса у больных коронарным атеросклерозом, абдоминальным ожирением и атерогенным фенотипом липопротеидов по сравнению с больными ишемической болезнью сердца (ИБС) без ожирения и дислипидемии.
Целью настоящей работы явились сравнительное исследование некоторых показателей иммунного статуса и микроциркуляции у больных ИБС с абдоминальным ожирением и атерогенной дислипидемией и у больных ИБС с нормальной массой тела без нарушений липидного спектра крови, а также поиск связей между иммунологическими и метаболическими показателями.
Исследование микроциркуляции проведено методом биомикроскопии конъюнктивы в 3 группах обследованных: 1-я группа — 17 больных ИБС без ожирения и нарушений липидного обмена (возраст 48,1 ± ± 2,2 года, индекс массы тела — ИМТ 23,5 ± 0,4 кг/м2, общий холестерин — ХС 5,7 ± 0,2 ммоль/л); 2-я группа — 21 больной ИБС с ожирением и гиперлипидемией (возраст 53,2 ± 1,4 года, ИМТ 32,6 ± ± 0,8 кг/м2, общий ХС 8,0 ± 0,3 ммоль/л, наличие артериальной гипертензии) и 3-я (контрольная) группа — 27 здоровых мужчин без ожирения и с нормальным липидным спектром крови (возраст 52,4 ± 1,5 года). Иммунный статус исследовали у 8 больных ИБС без ожирения и дислипидемии (группа А), 10 больных ИБС с абдоминальным ожирением и дислипидемией (группа Б) и 20 здоровых доноров без ожирения и с нормальным липидным спектром крови в качестве контроля (группа В) (возраст 32—50 лет). Коронарный атеросклероз в группах А и Б документирован ангиографически. Характеристика больных групп А и Б представлена в табл. 1. В данное исследование вошли только лица мужского пола.
Оценка иммунного статуса. Субпопуляции Т-лимфоцитов (CD4+, CD8+, CD95+) определяли методом непрямой иммунопероксидазной реакции с использованием моноклональных антител на препаратах лимфоцитов типа высушенной капли производства Онкологического научного центра
Характеристика больных групп А и Б
| Показатель | Группа А (и = 8) | Группа Б (п = 10) |
| Возраст, годы | 46.9 ± 2,2 | 49.2 ± 2,3 |
| ИМТ. кг/м2 | 25,7 ± 1,4 | 30.5 ± 0,4” |
| Триглицериды, ммоль/л | 1.8 ± 0,2 | 3.1 ± 0.4” |
| ХС ЛПВП. ммоль/л | 1.1 ± 0,1 | 0.8 ± 0,1* |
| Общий ХС. ммоль/л | 5.6 ± 0,4 | 6,5 ± 0.3 |
| Артериальная гипертензия | 2 (25%) | 10 (100%) |
Примечание. * — р < 0,05; **р < 0.01 по сравнению с группой А.
РАМН (Москва). Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) определяли, используя тест-системы производства РЕА (Чита).
Биомикроскопия конъюнктивы глазного яблока. Изучение микроциркуляции проводили путем визуального исследования микрососудов конъюнктивы с помощью щелевой лампы ЩЛ-56. При интерпретации результатов использовали систему качественно-количественной оценки, представляющую собой систему баллов сосудистых, внесосудистых и внутрисосудистых изменений. Сумма баллов представляет собой конъюнктивальный индекс (КИ), максимальное значение которого составляет 48. Наряду с общим КИ определяли парциальные индексы: КИ,, отражающий внесосудистые изменения; KHj, выявляющий нарушения архитектоники микрососудов, и КИ3, отражающий изменения микрогемодинамики и реологических свойств крови. Максимальные значения КИ|, КИ2 и КИ3 составили 4, 24 и 20 баллов соответственно.
Статистические методы. Результаты представлены как средняя арифметическая ± ошибка средней. Различия между средними значениями анализировали с помощью /-критерия Стьюдента. Вычисляли также коэффициенты парной корреляции.
В настоящем исследовании анализировали субпопуляции циркулирующих лимфоцитов, обладающих контактной цитотоксичностью (CD4+, CD8+), активированные Т-лимфоциты с рецептором Fas/APO = 1 (CD95+), маркером апоптоза. ЦИК с IgM. Определяли также отношение CD4+/CD8+. Полученные данные в исследуемых группах суммированы в табл. 2.
Таблица 2
Результаты исследования субпопуляций Т-лимфоцитов, отношения CD4+/CD8+, уровней ЦИК с IgM (М ± т)
Показатель
CD4 +клетки • 109/л CD8+клетки • 109/л CD95+клетки • 109/л CD4+/CD8+клетки, усл. ед.
ЦИКе IgM. г/л
| Группа А (л = 8) | Группа Б (л = 10) |
| 0,51 ± 0,08**’ | 0.88 ± 0,12 |
| 0,59 ± 0,14” | 0,94 ±0,10* |
| 0,68 ± 0,09** | 1,21 ± 0,16* |
| 0,99 ±0,15* | 0,89 ±0,15* |
| 3,74 ± 0.53* | 4,58 ± 0,54* |
1,68 ± 0,16
1,53 ± 0,38
Группа В (л = 20)
0,89 ± 0.09
0.58 ± 0,08
0,67 ± 0,06
Примечание. * — р < 0,01 по сравнению с группой В (контроль); ** — р < 0.05 по сравнению с группой Б (ИБС с ожирением и дислипидемией); *** — достоверные различия данных между группами.Как следует из табл. 2, в группе больных ИБС с ожирением и дислипидемией выявлены самые высокие уровни цитотоксических Т-лимфоцитов — ЦТЛ (CD8+) и Т-клеток с молекулой Fas (0,94 ± ± 0,10109/л; 1,21 ± 0,16109/л), достоверно отличающиеся от соответствующих показателей в группе больных ИБС без ожирения (0,59 ± 0,14 • 109/л; 0,68 ± 0,09109/л; р < 0,05) и в контроле (0,58 ± ± 0,08109/л; 0,67 ± 0,06109/л; р < 0,01). Количество Т-хелперов (CD4+) в группе больных ИБС с ожирением и дислипидемией (0,88 ± 0,12 • 109/л) не отличалось от такового в контрольной группе (0,89 ± 0,09109/л), но было значимо выше (р < 0,05), чем в группе больных ИБС без ожирения и дислипидемии (0,51 ± 0,08 • 109/л). Отношение CD4+/CD8+ в группах больных ИБС было ниже 1 и существенно отличалось от группы здоровых лиц, где данное отношение составило 1,68. Это свидетельствует об относительном преобладании ЦТЛ среди больных с коронарным атеросклерозом. Группы больных ИБС отличались также аномально высокими концентрациями ЦИК с IgM (3,74 ± ± 0,53 г/л в группе А и 4,58 ± 0,54 г/л в группе Б), которые достоверно превышали уровень ЦИКе IgM в контрольной группе (1,53 ± 0,38 г/л). Данный факт отражает аутосенсибилизацию; можно полагать, что токсические концентрации ЦИК способствуют повреждению микрососудов. Это предположение подтверждают полученные нами результаты биомикроскопии конъюнктивы.
Результаты исследования микроциркуляции представлены в табл. 3. Как видно из табл. 3, общий КИ и парциальные индексы в группах больных ИБС существенно отличались от контроля (р < 0,001), однако самые выраженные изменения микроциркуляции выявлены у больных с ожирением и гиперлипидемией, во 2-й группе найдены самые высокие значения всех КИ.
Изучение экспрессии антигена Fas на субпопуляциях лимфоцитов периферической крови показало, что он представлен на CD8+и СЭ4+-лимфоцитах, несущих CD45-ИО-антиген, являющийся маркером Т-клеток памяти. Аномальная активация (с усилением функции) Fas-рецептора или Fas-лиганда может участвовать в патогенезе различных заболеваний, таких как ишемические повреждения различных органов или ЦТЛ-опосредованные аутоиммунные процессы [2, 7].
Нами выявлены корреляционные зависимости между CD4+ и CD95+ (г = +0,85; р < 0,001), а также
Таблица 3
Результаты исследования сосудов конъюнктивы глазного яблока
| Группа обследованных | КИ, усл. ед. (Л/ ± m) | |||
| общий КИ | КИ| | КИ2 | КИ, | |
| 1-я | ||||
| (n= 17) | 11.65 ± 0,95 | 1,41 ± 0,17 | 7,00 ± 0.79 | 3.24 ± 0,33 |
| 2-я | ||||
| (n = 21) | 17,76 ± 1,30 | 2.14 ± 0.21 | 10,19 ± 0.62 | 5,43 ± 0,69 |
| 3-я | ||||
| (n = 27) | 4,07 ± 0,40 | 0.37 ±0.11 | 3,19 ± 0,28 | 0,55 ±0,13 |
| Pl-2 | < 0.001 | < 0,01 | < 0,01 | < 0,01 |
| Pl-3P2-3 | < 0,001 | < 0,001 | < 0,001 | < 0,001 |
Достоверные коэффициенты корреляции показателей иммунного статуса с другими изучаемыми показателями
| Иммунологический показатель | Сопоставляемый показатель | Г | Р |
| Маркер CD95+ | ИМТ | +0,56 | < 0,05 |
| Общий ХС | +0,77 | < 0,01 | |
| ХС ЛПНП | +0,67 | < 0.05 | |
| ХС ЛПВП | -0,56 | < 0,05 | |
| Триглицериды | +0,72 | < 0,01 | |
| Креати нфосфокиназа | +0,85 | < 0,001 | |
| ЦИК c IgM | ХС ЛПНП | +0,62 | < 0,05 |
| Маркер CD4+ | ХС ЛПНП | +0,61 | < 0,05 |
между CD4+ и CD8+ (г = +0,71; р < 0,01) у больных с ожирением и атерогенной дислипидемией.
Установлены связи между иммунологическими и метаболическими показателями, что отражено в табл. 4.
Таким образом, наши данные позволяют сделать заключение о том, что молекула Fas (CD95+) обнаруживает статистически значимые корреляционные связи с показателями липидного спектра крови, с ИМТ и креатинфосфокиназой. Доказано, что Fas-рецептор экспрессируется не только в тимоцитах и лимфоцитах, но и в других тканях, включая печень, легкие, сердце [
Из большого количества заболеваний, возможно, связанных с апоптозом и требующих изучения, 2 проблемы являются наиболее актуальными — это атеросклероз и возрастные изменения сердца.
Выводы
The authors declare that there are no conflicts of interest present.