Генетический материал получен и проанализирован у 118 больных СД 2-го типа в возрасте от 45 до 60 лет. Продолжительность заболевания в среднем составила 7,8 ± 5,7 года. Для оценки влияния полиморфизма гена МТГФР на развитие ИБС больных разделили на 2 группы. В 1-ю группу вошли 69 больных СД 2-го типа с ИБС, средний возраст 53,6 ± 4,4 года, в этой группе у 42 человек (у 18 мужчин и 24 женщин) в анамнезе был инфаркт миокарда, средний возраст 53,7 ± 7,5 года.

2-ю группу составили 49 больных СД 2-го типа без ИБС (15 мужчин и 34 женщины), средний возраст 52,1 ± 4,3 года.

Критерии исключения из 1-й и 2-й групп: возраст пациента до 45 лет и старше 60 лет; наличие у пациента хронической почечной недостаточности, обострения сопутствующих хронических заболеваний, гнойно-некротических осложнений, В|2-фо- лиеводефицитной анемии, а также лечение фолиевой кислотой или витаминами группы В в течение последнего месяца.

В контрольную группу вошли 89 человек (доноры крови) в возрасте от 45 до 60 лет без нарушений углеводного обмена и атеротромботических проявлений в анамнезе.

Всем больным проводили полное клинико-лабораторное обследование. ИБС выявляли холтеровским мониторированием ЭКГ на аппарате Market! HELLIGE и тредмилметрией на аппарате HEL- LIGE CardioSoft V3.0.

Уровень ГЦ определяли иммуноферментным методом на анализаторе закрытого типа IMMU- LITE 2000 наборами Homocysteine (AXSIS) с использованием реактивов фирмы-производителя (ОРС, США) в Новосибирском НИИ туберкулеза М3 РФ, ООО "Лабораторная диагностика" (зав. лабораторией — канд. мед. наук В. В. Романов).

Исследуемым материалом для молекулярно-генетического анализа служили соскобы буккальных эпителиальных клеток. ДНК выделяли методом фенол-хлороформной экстракции. Полиморфные участки амплифицировали с помощью полимеразной цепной реакции на амплификаторе "Ерреп- dorff”, использовали праймеры, синтезированные в Институте химической биологии и фундаментальной медицины (ИХБФМ) СО РАН. Исследование проводила группа фармакогеномики ИХБФМ СО РАН (руководитель — канд. биол. наук М. Л. Филипенко).

Статистический анализ проводили с применением пакетов прикладных программ "Биостат" и "Statistica 6.0". Все данные приведены в виде средних арифметических значений и их стандартного отклонения (Л/ ± SD). Соответствие распределения аллелей и генотипов равновесию Харди- Вайнберга проверяли по критерию согласия Пирсона. Достоверность коэффициентов различий принимали при значении р < 0,05. Для оценки ассоциаций полиморфных вариантов генов с патологическим фенотипом рассчитывали относительный риск (OR — odds ratio) по формуле:

OR = а • d/b • с,

где а — частота анализируемого аллеля у больных; b — частота анализируемого аллеля в контрольной выборке; с и d — суммарная частота остальных аллелей у больных и в контрольной группе соответственно. При OR = 1 ассоциация отсутствовала, при OR > 1 имела место положительная ассоциация аллеля с заболеванием ("фактор риска"), при OR < 1 — отрицательная ассоциация аллеля с заболеванием, протективное действие данного аллеля.

Исследование выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации "Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека" с поправками 2000 г. Пациенты давали письменное информированное согласие на участие в исследовании.

В данном исследовании анализ полиморфизма гена МТГФР у больных СД 2-го типа выявил преобладание нормального аллеля С677, который определялся у 75,4% пациентов. При этом аллель Т677, который в некоторых исследованиях зарекомендовал себя как маркер ССЗ [8, 9], отмечался у 24,6% больных СД 2-го типа и у 21,9% лиц контрольной группы (OR = 1,161, С. I. = [0,731 — 1,844], х2 = 0,40, р = 0,52) (табл. 1). Частота встречаемости генотипов соответствовала закону Харди-Вайнберга (см. табл. 1). У 35,6% обследуемых больных СД 2-го типа встречался гетерозиготный генотип С677Т, у 57,6% — гомозиготный (нормальный) генотип С677С, у 6,8% больных — гомозиготный генотип Т677Т. Статистически значимое различие в частотах встречаемости генотипов С677С, С677Т и Т677Т между больными СД 2-го типа и контрольной группой не выявлено (см. табл. 1). При расчете стратификационного риска получена некоторая ассоциация СД 2-го типа с аллелем Т677 (OR = 1,1), гомозиготным генотипом Т677Т (OR =1,2) и гетерозиготным генотипом С677Т (OR = 1,1), однако данная ассоциация не являлась достоверной.

Существуют данные о более высоком риске развития ИБС у людей с гомозиготным генотипом Т677Т [4, 6].

Среди задач данного исследования было изучение полиморфизма гена МТГФР как одного из факторов, влияющих на обмен ГЦ и на развитие ИБС. По результатам исследования у больных с ИБС были достоверно выше следующие показатели: длительность течения СД и артериальной гипертонии (АГ), уровень гликемии натощак и после еды, уровень гликозилированного гемоглобина (НЬА1С). Также при наличии ИБС зарегистрированы более высокие уровни общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ), липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) и сниженные показатели липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) (табл. 2). Полученные результаты не противоречат данным литературы, повышенный уровень указанных показателей у пациентов с СД сопровождается возрастанием риска ССЗ [10, 13].

Таблица 1

Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса С677Т гена МТГФР у больных СД 2-го типа и в контрольной группе

Таблица 2

Клинико-лабораторная характеристика больных СД 2-го типа с ИБС и без ИБС

Примечание. КА — коэффициент атерогенности. ♦ — достоверность различий между группами, р < 0,05.

В нашем исследовании частота аллеля Т677 гена МТГФР у больных СД 2-го типа с ИБС и без ИБС достоверно не отличалась и составила 26,8 и 21,4% соответственно (табл. 3).

При анализе распределения генотипов гена МТГФР у 7,3% больных СД 2-го типа с ИБС и у 6,1% пациентов без ИБС выявлено наличие гомозиготного (Т677Т) генотипа МТГФР (см. табл. 3). Гетерозиготный генотип С677Т преобладал у больных 1-й группы (с СД 2-го типа и ИБС), по сравнению с больными 2-й группы (с СД 2-го типа без ИБС) — 39,1 и 30,6% случаев соответственно. При расчете стратификационного риска выявлена некоторая ассоциация СД 2-го типа в сочетании с ИБС с аллелем Т677 (OR = 1,3), гомозиготным генотипом Т677Т (OR = 1,4) и гетерозиготным генотипом С677Т (OR = 1,3), однако данная ассоциация не являлась достоверной. Аналогичные данные описаны и другими авторами. В группе французских, шведских и австралийских больных с ССЗ также не выявлена ассоциация аллеля Т677 и генотипа Т677Т гена МТГФР с атеросклеротическим поражением коронарных артерий [6, 7, 14].

В исследованиях японских ученых выявлена высокая частота аллеля Т677 у больных с повторными инфарктами миокарда и корреляция данного аллеля с уровнем ГЦ в сыворотке крови [11, 12]. В исследовании A. Gardemann и соавт., опубликованном в 1999 г., был проанализирован полиморфизм С677Т гена МТГФР почти у 2500 европейцев с ангиографически верифицированным атеросклерозом коронарных артерий. Авторы отмечали, что носители гомозиготного генотипа Т677Т имеют более высокий показатель атеросклеротического поражения коронарных артерий, чем лица, несущие хотя бы 1 аллель С677 [9].

В связи с этим был проведен анализ полиморфизма гена МТГФР у больных СД 2-го типа с ИБС в зависимости от наличия или отсутствия в анамнезе инфаркта миокарда. Пациенты с СД 2-го типа с инфарктом миокарда в анамнезе отличались от контрольной группы по частоте встречаемости аллеля Т677 (OR = 1,879, С. I. = [1,059-3,333], х2 = 4,72, р = 0,029) и С677 (OR = 0,532, С. I. = [0,3000,944], х2 = 4,72, р = 0,029). У больных с перенесенным инфарктом миокарда реже, чем в контрольной группе, наблюдался гомозиготный генотип С677С (OR = 0,420, С. I. [0,199-0,890], х2 = 5,24, р = 0,022). Обнаружена также высокая частота генотипа С677Т и Т677Т (50 и 9,5% соответственно) в этой группе больных по сравнению с контрольной группой (32,6 и 5,6% соответственно), но данное различие носило недостоверный характер (табл. 4). Носители аллеля Т677 имели повышенный риск развития инфаркта миокарда (OR = 1,879, С. I. = [1,059-3,333], X2 = 4,72, р = 0,029).

.                                                  Таблица 3

Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса С677Т гена МТГФР у больных СД 2-го типа с ИБС и без ИБС

Больные СД 2-го типа с ИБС (л = 69)              101 (73,2)           37 (26,8)           37 (53,6)            27 (39,1)              5 (7,3)              0,980493

Больные СД 2-го типа без ИБС (л = 49)           77 (78,6)             21 (21,4)           31 (63,3)            15 (30,6)              3 (6,1)              0,524539

Таблица 4

Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса С677Т гена МТГФР у больных СД 2-го типа с ИБС и перенесенным инфарктом миокарда, с ИБС без инфаркта миокарда и без ИБС

Больные СД 2-го типа с ИБС и инфарк-

Таблица 5

Полиморфный локус (С677Т) гена МТГФР и уровень ГЦ в сыворотке крови у больных СД 2-го типа и в контрольной группе

Примечание. *— достоверность различий с контрольной группой, р < 0,05.

У больных с инфарктом миокарда в анамнезе частота встречаемости полиморфизма гена МТГФР была выше по сравнению не только со здоровыми людьми, но и с пациентами с СД без ИБС и с ИБС, но без инфаркта миокарда. Так, аллель Т677 определялся у 34,5% больных с инфарктом миокарда, у 14,8% больных без перенесенного инфаркта миокарда и у 21,4% больных без ИБС (х2 = 7,78, р = 0,02) (см. табл. 4). В группе пациентов с СД 2-го типа и перенесенным инфарктом миокарда обнаружено преобладание гетерозиготного С677Т (х2 = 6,43, р - 0,04) и гомозиготного Т677Т (х2 = 0,93, р = 0,62) генотипа по сравнению с пациентами с СД 2-го типа с ИБС и без инфаркта миокарда и СД 2-го типа без ИБС (см. табл. 4).

Известно, что полиморфизм гена МТГФР может быть одной из причин повышения ГЦ. У больных СД 2-го типа отмечались более высокие значения ГЦ, чем у лиц контрольной группы: 14,0 ± 5,2 ммоль/л при наличии СД 2-го типа и ИБС (р = 0,001), 11,6 ± 4,8 ммоль/л при СД и отсутствии ИБС и 9,38 ± 5,4 ммоль/л в контрольной группе. При распределении результатов исследования ГЦ в зависимости от полиморфизма гена МТГФР оказалось, что и у здоровых людей, и у больных СД (в 1-й и 2-й группах) наибольший уровень ГЦ выявлен при гомозиготном генотипе Т677Т (табл. 5). У пациентов с инфарктом миокарда в анамнезе при гомозиготном и гетерозиготном генотипе Т677Т и С677Т выявлены наибольшие значения ГЦ (табл. 6). Аналогичные результаты были отмечены также в работах японских ученых. К. Arai и соавт. получили данные о том, что уровень ГЦ выше у больных СД 2-го типа с Т677Т-геноти- пом гена МТГФР, чем у обследованных с С677С генотипом. Также в группе больных СД 2-го типа с Т677Т-генотипом выявлена высокая частота инфаркта миокарда. Таким образом, авторы пришли к выводу, что Т677Т-генотип гена МТГФР опосредованно, через умеренную гипергомоцистеинемию усиливает атеросклероз у больных СД 2-го типа и повышает риск инфаркта миокарда [5].

При проведении многофакторного регрессионного анализа уровня ГЦ у больных СД 2-го типа с ИБС и инфарктом миокарда в анамнезе и гомозиготным генотипом Т677Т с другими факторами риска ИБС, где в качестве независимых переменных в модели выступали длительность СД и АГ, уровень систолического и диастолического АД, гликемия натощак и после еды, НЬА1С, ОХС, ТГ, ЛПВП, ЛПНП, а в качестве зависимого — концентрация ГЦ, оказалось, что уровень ГЦ у больных с гомозиготным генотипом Т677Т зависел от гликемии натощак, среднесуточной гликемии, НЬА|С, ЛПВП, ТГ (R2 = 0,99; р = 0,014).

Таблица 6

Полиморфный локус С677Т гена МТГФР и уровень ГЦ в сыворотке крови у больных СД 2-го типа с ИБС и инфарктом миокарда и без него

Таким образом, повышенный уровень ГЦ при гомозиготном генотипе Т677Т гена МТГФР может являться важным фактором в развитии инфаркта миокарда при СД.