Эксперименты выполнены на мышах-самках F1(CBA*C57Bl/6) массой 20-22 г. ХГ (Profasi, “I. F. Serono S. р. А.”, Италия) использовали в дозах 10 или 50 МЕ/мл, что соответствует концентрации гормона в крови беременной на протяжении II—III триместра или на 70-й день беременности (пик секреции) соответственно [16].

Клетки интактной селезенки инкубировали с ХГ в течение 1 ч при 37°С. Для этого спленоциты помещали в культуральные флаконы со средой 199 в концентрации 5 • 106 ядросодержащих клеток (Я С К) в 1 мл. Количество спленоцитов в каждой отдельной культуре составляло 2 • ю7 яск.

Для оценки фукциональной активности клеток селезенки использовали модель сингенного переноса. Реципиентов подвергали тотальному облучению в дозе 219,3 мКл/кг на установке РУМ-17. Иммунокомпетентные клетки или отдельные фракции спленоцитов, предварительно подвергшихся воздействию ХГ в течение 1 ч in vitro, концентрировали так, чтобы количество клеток, находящихся в 1 культуре, трансплантировали 1 реце- пиенту. Суспензию антигена (эритроциты барана 2 • 108/0,2 мл) и исследуемые клетки внутривенно инъецировали реципиентам в 1 шприце. На 5-е сутки от момента переноса клеток мышей забивали, у них определяли количество антителообразующих клеток (АОК) методом локального гемолиза в геле агарозы [12].

Для выделения Т-лимфоцитов использовали метод фильтрования селезеночной суспензии через нейлоновую вату (“Нитрон”) [13]. Как правило, в элюате содержалось 70—75% Т-лимфоци- тов и 1—6% В-лимфоцитов. Для выделения В-лим- фоцитов применяли реакцию комплементзависи- мого масс-цитолиза. В качестве цитотоксических сывороток использовали моноклональные антитела к Thyl,2-антигенов мыши (“Диа-М”, Москва). При тестировании фракционированной суспензии 60—80% клеток были представлены ЕАС-розетко- образующими (В-лимфоциты) и 0—2% несли Thy 1,2-маркеры.

Функциональную активность Т- или В-лимфоцитов селезенки оценивали по эффекту кооперации, инъецируя 1 реципиенту (1:1) предобработан- ные Т- или В-лимфоциты с интактными В- или Т-клетками соответственно.

Удаление макрофагов из суспензии проводили методом активной адгезии на стеклянной поверхности [2]. Для определения функциональной активности фагоцитирующих клеток использовали хемилюминесцентный метод [6]. В качестве красителя применяли люминол (“Serva”). Интенсивность светового потока регистрировали с помощью биолюминометра БЛМ-8703М. Каждую пробу оценивали в триплетах. Результаты выражали в абсолютных единицах: квантах в секунду. Поскольку все исследования проводили на интактных спле- ноцитах, изучали только фоновую хемилюминесценцию. Световой поток регистрировали на 1, 5, 8-й минутах.

Все полученные результаты сравнивали с контролем (интактные спленоциты, инкубируемые в культурах без добавок).

Статистическую обработку результатов проводили, используя /-критерий Стьюдента [5]. Во всех расчетах оперировали log^ (lg) числа АОК.

Как видно из табл. 1, воздействие ХГ на гетерогенную популяцию спленоцитов до их контакта с антигеном вдвое снижает способность клеток формировать адоптивный иммунный ответ. После удаления из селезеночной суспензии адгезирующих клеток (А-клетки или макрофаги) способность спленоцитов формировать АОК резко снижается, что подтверждает эффективность проведенной селекции [2]. ХГ в данной суспензии теряет способность к иммунодепрессии и меняет направленность своих эффектов, активируя процессы формирования АОК (низкая доза).

Инкубация в течение 1 ч низкой дозы ХГ с клеточной суспензией, обогащенной В-лимфоцитами, приводит к двукратному приросту числа АОК, в то время как в высокой дозе гормон не дает значимых эффектов (см. табл. 1). При взаимодействии гормона с популяцией Т-клеток интактной селезенки ХГ, напротив, в высокой дозе угнетает, а в низкой не влияет на способность предшественников Т-лимфоцитов-хелперов формировать адоптивный иммунный ответ (см. табл. 1).

По-видимому, иммуностимулирующий эффект низкой дозы ХГ непосредственно связан с активацией В-лимфоцитов, находящихся на этапе анти- геннезависимой дифференцировки. Аналогичное действие низкой дозы гормона зафиксировано нами ранее в экспериментальной системе in vivo [8]. Макрофаги не только препятствуют, но и меняют направленость модулирующих эффектов низкой дозы ХГ. Очевидно, А-клетки выполняют роль “дирижера наивных” лимфоцитов, действие которого под влиянием ХГ направлено на иммуносупрессию. Эти данные также согласуются с результатами других исследователей [15], которые показали, что удаление моноцитов из культуры клеток периферической крови человека существенно снижает супрессорный эффект ХГ в реакции бластной трансформации. В высокой концентрации гормон не способен активировать В-лимфоциты, но достоверно угнетает функциональную активность Т-клеток.

Таблица 1

Влияние ХГ на функциональную активность отдельных популяций спленоцитов, реализующих адоптивный иммунный ответ (М ± т)

Таким образом, доза ХГ играет решающую роль в модуляции функциональной активности интактных спленоцитов только при условии отсутствия А-клеток. Если макрофаги находятся в суспензии — высокая и низкая дозы ХГ индуцируют иммуносупрессивные эффекты, если отсутствуют — доза 10 МЕ/мл активирует В-лимфоциты, а доза 50 МЕ/мл угнетает Т-клетки.

Поскольку для иммунорегулирующих эффектов ХГ макрофаги являются ключевыми, важно было оценить способность гормона непосредственно влиять на функциональную активность данных клеток. Известно, что одним из основных механизмов внутриклеточной деградации антигенного материала, подвергнутого фагоцитозу, является каскад ферментативных реакций, генерирующих разнообразные формы активного кислорода с высоким окислительным потенциалом [4, 7].

Как видно из табл. 2, инкубация ХГ в течение 1 ч в исследуемых дозах приводит к выраженному снижению фоновой хемилюминесценции спленоцитов, определяемой А-клетками (в предварительных экспериментах установлено, что активная адгезия спленоцитов на стеклянную поверхность лишает суспензию клеток селезенки возможности генерировать активный кислород, так как средний фоновый уровень свечения самого люминола был выше уровня, регистрируемого при внесении фракционированных клеток). Эффект ХГ не носит дозовой зависимости и, по-видимому, реализуется на уровне межуточного обмена А-клеток, так как на протяжении исследуемого времени, начиная с

Таким образом, можно говорить о способности ХГ прямо воздействовать на интактные макрофаги селезенки, угнетая их функциональную активность на уровне ферментных систем, генерирующих активные формы кислорода.

Суммируя представленный материал, необходимо отметить следующие основные моменты. Во- первых, ХГ в дозе, экстраполированной со среднего уровня в периферической крови беременных во

Таблица 2

Влияние ХГ на лиминолзависимую хемилюминесценцию интактных спленоцитов (М ± т)

5-я минута

ствие ХГ, что может быть связано с непосредственным угнетением эффекторных функций А-клеток, ассоциированных с формированием кислородзависимых механизмов резистентности. Взаимодействие низкой дозы ХГ с макрофагами не только снижает их эффекторный потенциал, но и побуждает эти клетки угнетать гормонзависимую активацию интактных В-лимфоцитов.

Во-вторых, высокая доза ХГ, отражающая концентрацию гормона в конце I триместра, реализует только иммуносупрессивные эффекты. Однако элиминация макрофагов нивелирует ХГ-зивиси- мую иммунодепрессию, несмотря на то, что гормон способен угнетать функциональную активность интактных Т-лимфоцитов. По-видимому, механизм иммуносупрессивного действия высокой дозы гормона зависит от соотношения и уровня А-клеток и Т-лимфоцитов, что определяет либо макрофагзависимую, либо макрофагнезависимую (непосредственное угнетение Т-лимфоцитов) депрессию иммунокомпетентных клеток.