problendoПроблемы Эндокринологии0375-96602308-1430Endocrinology Research Centre10.14341/probl11388Research ArticleОбзорыReviewsКомпоненты гамкергической системы и ее функция в эндокринных железахComponents of the hamkergic system and its function in the endocrine glandsМишунинаТ. М.probl@endojournals.ru<p>Институт эндокринологии и обмена веществ им. В. П. Комиссаренко АМН Украины</p>200415042004502ТОМ 50, №2 (2004)1523Copyright © Endocrinology Research Centre, 20042004This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.В первые годы после открытия в мозге позвоночных гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК), которая позже была признана основным тормозным медиатором ЦНС, считали, что она локализована исключительно в клетках нервной системы. Повышение чувствительности методов определения ГАМК позволило позже установить присутствие аминокислоты, ферментов ее обмена, систем транспорта, а также рецепторов и в клетках иных тканей и органов. Механизм действия ГАМК на периферии опосредован как мембранными рецепторами (в случае передачи нервного импульса или при трофическом действии), так и без их участия (при регуляции внутриклеточных процессов).
In the first years after the discovery in the brain of vertebrates of gamma-aminobutyric acid (GABA), which was later recognized as the main inhibitory mediator of the central nervous system, it was believed that it was localized exclusively in the cells of the nervous system. An increase in the sensitivity of GABA determination methods allowed later to establish the presence of amino acids, enzymes of its metabolism, transport systems, as well as receptors in cells of other tissues and organs. The mechanism of action of GABA on the periphery is mediated by both membrane receptors (in the case of transmission of a nerve impulse or trophic effect), and without their participation (in the regulation of intracellular processes).
гамкергическая системаэндокринные железынервная системаВ первые годы после открытия в мозге позвоночных гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК), которая позже была признана основным тормозным медиатором ЦНС, считали, что она локализована исключительно в клетках нервной системы. Повышение чувствительности методов определения ГАМК позволило позже установить присутствие аминокислоты, ферментов ее обмена, систем транспорта, а также рецепторов и в клетках иных тканей и органов. Механизм действия ГАМК на периферии опосредован как мембранными рецепторами (в случае передачи нервного импульса или при трофическом действии), так и без их участия (при регуляции внутриклеточных процессов) [34, 35]. Кроме медиаторной функции, ГАМК в ненейрональных тканях может играть трофическую и паракринную роль в процессах секреции и транспорта биологически активных соединений, подвижности сперматозоидов и их способности к оплодотворению, сокращения матки и маточных труб, механизмах клеточной пролиферации. Особо интересна, учитывая значение ГАМК в контроле нейроэндокринных механизмов деятельности эндокринных желез, роль аминокислоты в процессах регуляции синтеза и секреции гормонов собственно на уровне секреторной клетки.
Перед изложением данных литературы о локализации ГАМК, особенностях строения и функции ферментов ее обмена, транспортеров и рецепторов в эндокринных железах, а также возможной функции аминокислоты в них необходимо напомнить, что ГАМК в нервной ткани синтезируется из глутаминовой кислоты при участии фермента глутаматдекарбоксилазы (ГДК), которая присутствует в мозге в виде 2 изоформ — ГДК^ и ГДК^ (по величине молекулярной массы). Изоферменты различаются по нуклеотидной последовательности, клеточной и субклеточной локализации, иммунореактивности, факторам, контролирующим их активность, и нейрохимическим функциям. При экстремальных условиях определенное значение могут приобретать альтернативные пути синтеза аминокислоты, например образование ее из путресцина.
В дальнейшем метаболизме ГАМК принимает участие ГАМК-аминотрансфераза (ГАМК-Т). Фермент состоит из 2 идентичных субъединиц и локализуется в основном в постсинаптической зоне и несинаптосомальных митохондриях. Следующий фермент обмена ГАМК — дегидрогеназа полуальдегида янтарной кислоты (ДПЯК), которая катализирует реакцию окисления образовавшегося вследствие переаминирования полуальдегида янтарной кислоты. Анализ очищенной ДПЯК показал наличие в составе фермента только 1 субъединицы. На синаптических мембранах нейронов, а также мембранах глиальных клеток идентифицировано до 4 систем транспорта ГАМК и ряда ее аналогов. ГАМК-транспортеры (ГАМК-Тр) Na+ и СГ -зависимы и играют важную роль в реализации ГАМКергической нейротрансмиссии, регулируя высвобождение медиатора в синаптическую щель и обратный захват его нейронами и глиальными клетками.
В ЦНС присутствует несколько типов ГАМК- рецепторов (ГАМК-Р). Медиатор действует в основном через постсинаптический ГАМКЛ-Р, который является составной частью олигомерного рецепторного комплекса ГАМКа—бензодиазепин— СГ-канал (ГАКМа — БД —СГ -РК). Активность его модулируется рядом соединений, в том числе бензодиазепинами, барбитуратами, конвульсанта- ми, нейростероидами. Клонирование генов, которые отвечают за синтез 5 классов субъединиц (а, р, у, ст, р), составляющих этот рецептор, выявило более чем 17 генов млекопитающих, кодирующих функциональное взаимодействие подклассов субъединиц ГАМКа-Р. Комбинация этих субъединиц обусловливает различные функциональные и фармакологические свойства ГАМКа-Р. что, собственно, во многом и определяет многогранную роль ГАМК в регуляции разнообразных функций мозга. Установлено, что у-субъединица этого рецептора связана с тубулярными структурами синапса через так называемые ГАМКА-Р-ассоциированные белки.
ГАМКВ-Р в большинстве своем пресинаптиче- ские, они ассоциируются с Са2+- или К+-каналами через GTP-связывающие белки и модулируют высвобождение иных медиаторов. Известно, что ГАМКВ-Р является димером. Внеклеточный домен ГАМКВ|-Р играет роль в связывании лиганда, а аналогичная структура ГАМКВ2-Р способствует стабилизации рецептора на поверхности мембраны и отвечает за его активацию, повышая аффинность к агонистам. Трансмембранный домен ГАМКВ2-Р имеет место связывания G-белков, а ГАМКВ,-Р экспрессируется в виде ряда изоформ, которые различаются по молекулярной массе.
Не так давно описан еще один тип ГАМК-Р — С, функция которого близка к функции ГАМКД-Р. В то же время структура и фармакологические свойства ГАМКС-Р существенно отличаются от таковых ГАМКа-Р: он состоит из нескольких (2 или 3) р-субъединиц и нечувствителен к агентам, изменяющим активность ГАМКа-Р. Считают, что этот тип рецептора транзиторно экспрессируется в гап- покампе новорожденных крыс, а постоянно присутствует только в сетчатке, где был впервые выявлен. По другим данным, экспрессия р^субъедини- цы ГАМКС-Р с меньшей интенсивностью, чем в сетчатке, происходит во всех регионах мозга, а экспрессия р2-субъединины — только в сетчатке.
Присутствие всех или нескольких компонентов ГАМК-системы показано во многих ненейрональных тканях. Установлено как определенное подобие, так и отличие в строении функциональных, иммунологических и иных характеристик метаболических и рецеторных составляющих ГАМК-системы, которые были выделены из мозга и периферических органов, в частности из эндокринных желез.
Поджелудочная железа
Присутствие достаточно высокой, имеющей видовые отличия, концетрации ГАМК в поджелудочной железе установлено уже более, чем 2 десятилетия тому назад [34]. Последующие иммунологические исследования по изучению взаимосвязи между ГДК поджелудочной железы и развитием инсулинзависимого диабета вызвали повышенный интерес к физиологической роли ГАМК в железе. В настоящее время считают, что ГДК является одной из важнейших мишеней для антигена в развитии аутоиммунных процессов в поджелудочной железе, возможно, в связи с идентичностью аминокислотных последовательностей ГДК и вируса Коксаки [76], который эпидемиологически связывают с развитием инсулинзависимого диабета.
В железе присутствует как ненейрональная, так и нейрональная ГАМК. Последняя в парасимпатическом ганглии железы находится исключительно в глиальных клетках; на мембранах нейронов, однако, присутствуют ГАМКД-Р. Остается неизвестным источник аминокислоты в глиальных клетках, так как они не содержат ГДК [72]. ГАМК локализуется на периферии островков вместе с нервными окончаниями, которые простираются в покров первых [71, 76]. Нервные элементы в островках вместе с ГАМК содержат нейропептид У, что показано и для мозга [71]. В р-клетках островков Лангерганса аминокислота ассоциируется с везикулярным ком- партментом, который отделен от гранул, содержащих инсулин [52, 71, 76].
В р-клетках присутствуют обе формы ГДК [34], которые по своим иммунологическим и биохимическим характеристикам подобны таковым мозга [47]. В большинстве р-клеток ГДК определяется в уникальных тубулоцистернальных комплексах, открытых в сторону комплекса Гольджи [76]. Существует определенная видовая специфика присутствия разных форм фермента: в поджелудочной железе человека, овцы и крысы превалирующей формой является ГДК65 [69, 76], тогда как у мышей в основном экспрессируется ГДКб7 [73]. Количество мРНК ГДК65 в р-клетках железы человека в 200 раз больше, чем мРНК ГДКЙ, [26]. В поджелудочной железе человека, по последним данным, установлена также экспрессия короткого аналога ГДК67 — ГДК25, который не выявляется в мозге и не обладает ферментативной активностью [25]. В опытах на линии р-клеток китайских хомяков было выяснено, что только ГДК^; подвергается посттрансляционной модификации N-концевого отдела аминокислотной последовательности, что может иметь важное значение для связи фермента с мембраной. Модификация цистеиновых остатков в N-конце- вом отделе ГДК65 не способствует этому процессу, а лишение белковой цепочки аминокислотных остатков с 24-го по 31-й приводит к перемещению фермента в цитозоль. Считают, что первые 83 N- концевые аминокислоты ГДК65 содержат сигнал, который направляет белки к комплексу Гольджи [76]. Методом двойной иммунофлюоресценции показано, что 95% ГДК^ локализовано на мембранах малых везикул р-клеток и только 5% фермента находится в глюкагон- и соматостатинсекретирую- щих клетках островков овцы [69]. Экспрессия ГДК65 в поджелудочной железе нормальных мышей и мышей с диабетом снижается с возрастом, у молодых она также имеет половые различия; экспрессия ГДК67 при этом не зависит от возраста [65].
ГАМК-Т-иммунореактивный материал локализуется в р-, но не в а- или 5-клетках островков поджелудочной железы [76]; о ферментах дальнейшего метаболизма ГАМК в железе данных нет.
В опытах на культуре клеток поджелудочной железы млекопитающих и опухолях железы человека установлено присутствие на мембранах р-клеток системы транспорта ГАМК низкой аффинности, чувствительной к АТФ. Высвобождение ГАМК из малых везикул увеличивалось при стимуляции эк- зоцитоза [7], повышении уровня глюкозы [36, 74], но не было связано с секрецией инсулина [74]. В то же время известны данные о снижении высвобождения ГАМК из р-клеток при повышении концентрации или метаболизма глюкозы, что связывают с АТФ-зависимой активацией активности клетки в этих условиях [78].
Существование ГАМКа-Р в поджелудочной железе показано в условиях использования моноклональных антител [70]. По одним данным ГАМКа-Р поджелудочной железы крыс состоит преимущественно из СС|-, р3- и у3-субъединиц [13], по другим — в ней, а также в клетках инсуломы определяются мРНК, кодирующие синтез а,-, а2-, а3-, р,-, Р2-, рз-, 5- и у2-субъединиц ГАМКа-Р, а ткань поджелудочной железы человека содержит только мРНК а2-, Р3- и у-субъединиц [76]. В поджелудочной железе имеет место также экспрессия ГАМКА-Р-ассоции- рованных белков [79], а в р-клетках поджелудочной железы человека, крысы и в культуре р-клеток MIN6 установлено присутствие ГАМКВ1а- и ГАМКВ2-Р [16].
Содержание ГАМК в поджелудочной железе крыс с аллоксановым диабетом составило только 15%, а активность ГДК — 50% от уровня у интактных животных [55], что связано со значительной деструкцией р-клеток вследствие действия аллоксана. Уровень аминокислоты в поджелудочной железе был снижен и у мышей с генетически детерминированным диабетом [71]. В то же время одновременно с уменьшением концентрации ГАМК в островках крыс с экспериментальным стрептозото- циновым диабетом содержание аминокислоты и активность ГДК в островках поджелудочной железы больных диабетом, а также в инсуломе были значительно выше по сравнению с таковыми у здоровых людей [34]. Экспрессия ГДК^ у мышей с диабетом в 5 раз выше, чем у контрольных животных [65].
На первых этапах изучения функции ГАМК в поджелудочной железе предполагали, что ГАМК- шунт может быть альтернативным источником энергии для процесса синтеза инсулина [34]. О возможной роли ГАМК в механизмах секреции свидетельствуют данные о присутствии аминокислоты в малых везикулах, субклеточная локализация которых, спектр белков, содержащихся в них, и состав их мембран указывают на участие этих органел в экзоцитозе [52, 57]. Роль везикулярных белков в механизмах высвобождения ГАМК и инсулина различна [59].
В условиях ингибирования ГАМ К-Т поджелудочной железы гамма-винил-ГАМК внутриклеточное содержание аминокислоты повышалось на 77%, а интенсивность синтеза инсулина — на 69%. В то же время перфузия ГАМК изолированной железы собаки приводила к угнетению секреции инсулина [34], а в случае перфузии другим ингибитором ГАМК-Т — гамма-ацетилен-ГАМК стимуляции глюкозой секреции инсулина не происходило, хотя высвобождение гормона, стимулированное вследствие перфузии 3-фенилпируватом, было сниженным. Авторы предположили, что ГАМК может влиять на секрецию инсулина только при низких концентрациях глюкозы [76]. Внесение в среду культивирования ГАМК или агонистов ГАМКа-Р или ГАМКВ-Р мусцимола и баклофена соответственно не влияло на содержание и секрецию инсулина в клетках островков поджелудочной железы [76]. По другим данным, активация ГАМКВ-Р вследствие действия баклофена угнетала секрецию инсулина, однако эффект этот наблюдался лишь в присутствии глюкозы. Считают, что возможный механизм участия ГАМК в регуляции секреции инсулина включает в себя прямое влияние аминокислоты на Са2+- и К+-каналы, на последние посредством модуляции активности G- белков [16]. Во время секреции инсулина в поджелудочной железе крыс повышалась экспрессия ГДКИ [63]. Кроме того, на трансгенных мышах, экспрессирующих ГДК65 человека, было показано, что у животных с нормальной толерантностью к глюкозе интенсивность экспрессии ферментного белка была наименьшей по сравнению с таковой у животных со сниженным уровнем секреции инсулина или с нарушением толерантности к глюкозе. Результаты этих исследований позволили высказать предположение о том, что ГАМК может функционировать как отрицательный регулятор первой фазы секреции инсулина в ответ на увеличение уровня глюкозы [73].
Секреция соматостатина вследствие перфузии поджелудочной железы ГАМК снижалась, однако внесение аминокислоты в среду инкубации островков поджелудочной железы повышало высвобождение гормона. Последний эффект снимался антагонистом ГАМК.а-Р бикукуллином [34]. В случае культивирования изолированных островков с ГАМК или мусцимолом установлено, что содержание соматостатина в них было выше, а высвобождение гормона ниже, чем в контрольной культуре. В то же время* повышение уровня ГАМК в среде культивирования вследствие действия гамма-ви- нил-ГАМК или аминоуксусной кислоты не влияло на высвобождение соматостатина. В других исследованиях было показано, что ГАМК, мусцимол и баклофен не влияли на базальное или стимулированное высвобождение соматостатина и электрическую активность р-клеток, хотя экзогенная ГАМК и мусцимол снижали секрецию глюкагона, стимулированную низким уровнем глюкозы или аргинином [76]. Кроме того, бикукуллин не предотвращал угнетение секреции глюкагона под влиянием низких концентраций глюкозы. Принимая во внимание эти данные, авторы сделали вывод о том, что нет серьезных подтверждений гипотезы об участии ГАМК в торможении глюкозой высвобождения глюкагона. Это мнение не поддерживают другие исследователи, установившие угнетение секреции глюкагона при инкубации линии р-клеток в присутствии ГАМК, которое предотвращалось внесением в среду инкубации бикукуллина [36].
При исследовании возможных механизмов участия ГАМК в регуляции секреции гормонов поджелудочной железы были получены данные, позволяющие предположить, что аминокислота гипер- поляризует мембраны клеток и предупреждает образование потенциала действия, что совпадает по времени с развитием потока ионов С1_ наружу и снижением активности Са2+-каналов. Последнее приводит к снижению концентрации внутриклеточного Са2+ и ингибированию секреции глюкагона. Все эти эффекты предупреждались бикукуллином и пикротоксином [70]. В то же время, по данным других исследователей, ГАМК продуцировала повышение секреции глюкагона в изолированной ткани поджелудочной железы интактных крыс и крыс с диабетом [6].
В литературе есть сведения об изменении уровня инсулина, глюкагона, соматостатина и С-пеп- тида в крови людей и животных после введения ГАМК, агонистов и антагонистов ее рецепторов [34, 35]. Считают, что влияние этих веществ in vivo на секрецию гормонов поджелудочной железы может быть опосредовано через ЦНС. Доказательством этого, в частности, являются данные о стимуляции секреции гормонов в условиях инфузии мозга средой, содержащей бикукуллин. Однако у больных инсулинзависимым диабетом прием баклофена или ингибитора ферментов метаболизма ГАМК вальпроата натрия не изменял в крови уровень инсулина, С-пептида, глюкагона, соматостатина, а также толерантность к глюкозе [68].
Ряд работ посвящен изучению возможности терапевтического применения ГАМК и препаратов, изменяющих активность ее системы, в механизмах коррекции функции поджелудочной железы. Так, культивирование изолированных островков в присутствии различных концентраций глюкозы приводило к 4—5-кратному повышению экспрессии ГДК65; уровень ГАМК при этом оставался неизменным. Считают, что нормализация гликемии может снижать интенсивность экспрессии аутоантигена в островках, что будет предотвращать их деструкцию [48]. Это мнение поддерживается другими исследователями: инкубация островков в среде, содержащей высокую концентрацию глюкозы, приводила к повышению активности ГДК и уровня ферментативных белков ГДК65 и ГДК67. Этот эффект глюкозы тормозился гамма-винил-ГАМ К. Учитывая эти данные, для уменьшения интенсивности экспрессии аутоантигена, приводящей к торможению аутоиммунного ответа (3-клеток при инсулинзависимом диабете, теоретически предложено применение ингибиторов ГАМК-Т [64].
С целью разработки превентивной терапии инсулинзависимого диабета уже проведены экспериментальные исследования по применению ГАМ- Кергических препаратов для нормализации уровня инсулина и гликемии. Показано, что введение метаболита ГАМК — гамма-оксимасляной кислоты одновременно с никотинамидом в период действия стрептозотоцина предотвращало развитие экспериментального диабета у мышей. При инкубации изолированных островков поджелудочной железы в среде, содержащей стрептозотоцин, гамма-окси- масляную кислоту и никотинамид, секреция инсулина в ответ на внесение в среду глюкозы не нарушалась, что обычно наблюдали при действии одного стрептозотоцина [14]. Следует, однако, подчеркнуть, что в опытах in vivo и in vitro сама гамма- оксимасляная кислота, как и сам никотинамид такого превентивного эффекта не давали. При изучении влияния баклофена было установлено, что прием препарата мышами, у которых развитие диабета запрограммировано генетически, приводило к задержке времени начала заболевания, хотя степень выраженности инсулитов и активность ГДК в поджелудочной железе не изменялись. Авторы считают баклофен перспективным препаратом, действие которого направлено на активацию ГАМКер- гической системы, локализованной в островках поджелудочной железы, с которой ассоциируются как экспрессия аутоантигена, так и модуляция секреции инсулина [10].
Следовательно, несмотря на многочисленность исследований, роль ГАМК в регуляции секреции гормонов поджелудочной железы остается еще в значительной степени неясной [69].
Надпочечники
Концентрация аминокислоты в надпочечниках невелика, активность ГДК и ГАМК-Т также находится на низком, как для периферических тканей, уровне [34]. Однако пересадка ткани мозгового слоя надпочечников в стриатум крыс, у которых эта структура мозга была разрушена вследствие введения каиновой кислоты, вполне компенсировала дефицит ГАМКергических нейронов, что способствовало нормализации нарушенного поведения крыс [46].
ГАМК в мозговом слое надпочечников локализуется в клетках вместе с адреналином и норадре-
налином [31]. В 1-ю неделю после рождения ни в одной из хромаффинных клеток мышат, как и у плодов, ГАМК-иммунореактивный материал не определялся; до 2-ю неделю жизни количество его повышалось до величины, характерной для надпочечников взрослых животных [44]. По другим данным, клетки культуры эмбриональных хромаффинных клеток, пересаженные под субарахноидальную оболочку спинного мозга, были способны экспрессировать ГАМК-иммунореактивный материал [30].
Данные литературы относительно локализации ГДК в надпочечниках противоречивы. Установлено, что только 40% клеток в культуре хромаффинных клеток надпочечников быка реагировали с антителами, специфичными к ГДК из мозга. Использование таких антител для выяснения локализации фермента показало, что ГДК находится исключительно в клетках, секретирующих адреналин [35]. В то же время известны сведения об отсутствии ГДК^ в надпочечниках человека и крыс [76]. Данные последних лет свидетельствуют о том, что в надпочечниках человека, мыши и крысы экспрессируются все 3 формы ГДК — 65, 67 и 25 [25]. При определении активности ГДК биохимическими методами показано ее присутствие в ткани надпочечников крыс, кроликов, человека, коры надпочечников человека, морских свинок, мозговом слое надпочечников коров [1,2, 34]. Часть ГАМК в надпочечниках синтезируется из путресцина [75].
Что касается ГАМК-Т, то хотя она иммунологически и выявляется в культуре хромаффинных клеток быка [76], однако основной катаболизм ГАМК в надпочечниках, похоже, происходит при участии других механизмов. Биофизические и кинетические показатели ГАМК-Т мозгового слоя надпочечников быка близки к таковым для фермента мозга [60], но блокатор ГАМК-Т 2-аминоук- сусная кислота не способна повысить уровень ГАМК в органе, как это происходит в мозге или, например, в поджелудочной железе [76].
'Из мозгового слоя надпочечников быка была частично очищена ДПЯК, фермент подобен нейрональному в отношении pH-оптимума, локализации (в митохондриях), чуствительности к АТФ, аффинности к субстрату и кофактору. Клетки мозгового слоя надпочечников содержат также систему транспорта ГАМК и ее специфические рецепторы, что, как считают, вместе с данными, характеризующими функционирование ферментов обмена ГАМК, может свидетельствовать о регуляторной роли аминокислоты в хромаффинных клетках [76]. ГАМКа-Р здесь связаны с бензодиазепиновыми, и функциональные характеристики этого комплекса очень близки таковым в мозге. В составе ГАМКа-Р определяют а,-, а4-, р,-, р2-, р2- и у2-субъединицы [61], а длинная субъединица ГАМКВ-Р экспрессируется в надпочечниках в виде 2 изоформ — ГАМКВ1аи ГАМКВ|Ь [11, 21].
Выяснено, что высвобождение ГАМК и норадреналина происходит параллельно, хотя ГАМК высвобождается всегда в меньшем количестве. Стимулированное никотином и К+ высвобождение ГАМК зависит от Са2+, а при действии вератридина наблюдали Са2+-независимый, но зависящий от 1Ча+-компонент, который блокировался ингибиторами захвата ГАМК. Считают, что оба эти механизма могут принимать участие в ГАМКергическом контроле секреции катехоламинов [60].
Представление об этой функции ГАМК сформировалось на основании данных о влиянии аминокислоты и ее миметиков на высвобождение катехоламинов и состояние тех процессов, которые непосредственно задействованы в регуляции секреции. ГАМК вызывала Са2+-зависимое повышение высвобождения катехоламинов, что имело дозозависимый характер и составляло 2/3 от уровня никотинстимулированного [76]. Предполагают существование двойной регуляции секреции катехоламинов: активация ее опосредована ГАМКа-Р, а торможение — ГАМКВ-Р. Этот вывод базировался на результатах, свидетельствующих об имитации мусцимолом действия ГАМК, которая в свою очередь снималась бикукуллином и баклофеном. Последний подавлял как никотин- и КС1-стимулиро- ванное, так и базальное высвобождение катехоламинов [49]. Мусцимол одновременно с влиянием на секрецию катехоламинов вызывал также вход Са2+ в клетки; считают, что этот процесс важен именно для инициации высвобождения гормонов [39]. Поскольку повышение уровня внутриклеточного Са2+ зависит от внеклеточной его концентрации, влияние ГАМК на вход Са2+ в клетки может быть опосредовано хотя бы частично потенциал- чувствительными Са2+-каналами [49]. Кроме этого, показано, что ГАМК ингибирует спонтанные колебания концентрации и высвобождения Са2+ в хромаффинных клетках надпочечников крыс. Такое же действие оказывает и мусцимол, но не баклофен. Эффект аминокислоты и агониста ГАМКа- Р снимался бикукуллином [17, 58]. Принимая во внимание эти данные, а также способность ГАМК деполяризировать мембраны хромаффинных клеток, авторы считают значительной ее роль в физиологической регуляции функции мозгового слоя надпочечников [17].
В опытах in vivo баклофен, введенный перед началом плавания, предотвращал стрессовое повышение секреции адреналина и значительно снижал в крови крыс концентрацию дофамина. В то же время введение баклофена животным, находящимся в состоянии покоя, вызывало повышение секреции катехоламинов [4], как и внесение этого агониста ГАМКВ-Р в среду инкубации хромаффинных клеток in vitro [62]. Следовательно, эффект активации ГАМКВ-Р на процессы секреции катехоламинов, а также роль первых в регуляции функции клеток мозгового слоя надпочечников остаются до конца не ясными.
Интересными представляются результаты исследований влияния вальпроата натрия: ингибитор ферментов обмена ГАМК, внесенный в среду культивирования хромаффинных клеток быка, вызывал повышение синтеза белка, экспрессии одной из субъединиц К'ат-каналов, спонтанной и стимулированной активности последних, а также Са2+-ка- налов и секреции катехоламинов. Выводом из этих
данных явилось предположение о том, что вальп- роат натрия (или повышенный уровень ГАМК ?) регулирует экспрессию или активность ионных каналов плазматических мембран хромаффинных клеток, вследствие чего повышается секреция катехоламинов [80].
Модулирующее влияние метаболитов прогестерона на активность ГАМКа—БД—СГ-РК было показано при изучении субмаксимального потока ионов в целых клетках культуры хромаффинной ткани надпочечников быка. Интенсивность этого процесса повышалась в условиях внесения в среду культивирования прегнандиона или 5[3-прегнан- За-ол-20-она, но не прогестерона [18]. Все указанные вещества вызывали в клетке, находящейся под напряжением, внутренний ток, который, как и в случае индукции ГАМК, обратимо блокировался бикукуллином и усиливался фенобарбиталом. Пре- гнанолон также повышал мусцимолстимулирован- ную секрецию катехоламинов в изолированных хромаффинных клетках [61].
Данных о локализации и функции компонентов ГАМК-системы в коре надпочечников значительно меньше. Здесь определяются активность фермента синтеза ГАМК и специфическое связывание аминокислоты плазматическими мембранами, которые, как и в мозге, подвержены сезонным изменениям [1]. Кроме того, активность ГДК и интенсивность связывания аминокислоты изменяются в надпочечниках в условиях физиологической или гормональной модификации интенсивности стероидогенеза, а также при патологии коры надпочечников человека [1—3].
Половые железы
В яичниках животных концентрация ГАМК находится на среднем, как для периферических органов, уровне, в гранулярных клетках она отсутствует. Активность ГДК и ГАМК-Т низка [34]. Считают, что последнее, а также неспособность ингибиторов ГАМК-Т повысить уровень ГАМК в яичниках могут свидетельствовать о наличии в ткани этого органа альтернативных путей метаболизма ГАМК. Аминокислота тут может образовываться из путресцина, однако неизвестно, происходит ли катаболизм ГАМК до спермидина, как неизвестно и присутствие в яичниках ДПЯК.
На мембранах яичников человека и крыс определены специфические высокоаффинные места связывания ГАМК, плотность которых очень высока и может быть сравнима с плотностью мест связывания ГАМК в мозге [8, 34]. С помощью специфических фармакологических препаратов эти места были идентифицированы как ГАМКД-Р, входящие в ГАМКа—БД—СГ-РК и ГАМКВ-Р, причем характеристики их оказались очень близкими к таковым для ГАМК-Р мозга [34]. Интересно, что в яичниках экспрессируются мРНК pi-субъединицы ГАМКа-Р, которые встречаются в некоторых периферических органах и отсутствуют в мозге [41], а также ГАМКд-Р-ассоциированные белки, экспрессия одного из них существенна [79]. мРНК ГАМК- В1-Р экспрессируется в яичниках в виде 2 изоформ [21 ], а интенсивность экспрессии и функция в яичниках ГАМК-Тр, характеристики которого близки к таковым для мозгового, контролируются многими внутриклеточными сигнальными системами, в частности тирозинкиназой и протеинкиназой С [51].
Результаты немногочисленных экспериментов указывают на зависимость концентрации ГАМК и активности ферментов ее обмена в яичниках от уровня половых гормонов. Установлено, что содержание ГАМК в яичниках изменяется в течение эс- трального цикла [35]; гипофизэктомия или овари- эктомия вызывали существенное уменьшение активности ГДК и уровня ГАМК, а беременность сопровождалась прогрессивным увеличением ее содержания [34].
Концентрация ГАМК в семенниках составляет около 2% от таковой в мозге. Среди изоферментов ГДК в сперматоцитах и сперматозоидах, но не в клетках Лейдига или Сертоли присутствует лишь ГДК67, которая по данным гибридизации, иммунологических исследований и определения аминокислотной последовательности очень близка к ферменту мозга [34, 76]. Следует отметить, что в яичках человека экспрессируется и короткая форма ГДК67 - ГДК25 [25]. Как и ГДК, ГАМК-Т из яичка человека подобна ферменту из мозга [34].
Существование ГАМКД-Р на мембранах семенников показано в опытах in vitro при определении влияния ГАМК, агонистов и антагонистов ГАМКД- и ГАМКВ-Р на функцию этого органа [21], а также в серии молекулярно-биологических исследований по клонированию разных форм ГАМК-Р [21, 40, 79]. Так, было установлено, что в семенниках взрослых крыс экспрессируется только мРНК длинной субъединицы ГАМКВ-Р, которая выявляется в 2 [11] или 3 [40] изоформах. В семенниках крыс имеет место экспрессия у,- (но не у2- или у3-) субъединицы ГАМКа-Р. Присутствие исключительно у,-субъединицы ГАМКЛ-Р в семенниках может свидетельствовать об ее специфической функциональной роли [42]. В яичках человека установлена экспрессия всех ГАМКд-Р-ассоциированных белков, связанных с у-субъединицей ГАМКД-Р; интенсивность экспрессии одного из них существенна [79].
В семенниках мышей процесс транскрипции ГАМК-Тр имеет ряд особенностей, которые отличаются от характера его транскрипции в мозге [45, 54]. Этот транспортер также локализован на мембранах сперматидов и сперматозоидов [42]. Транспорт ГАМК Na+- и СГ-зависим, интенсивность его имеет значительные индивидуальные отличия [5].
В опытах на хомяках было показано, что уровень ГАМК в семенниках значительно повышался в препубертатном периоде. Это происходило до начала повышения концентрации тестостерона и одновременно с увеличением концентрации предшественника ГАМК глутаминовой кислоты [32]. При содержании хомяков на протяжении 9—22 нед в условиях короткого светового периода на фоне прогрессирующей инволюции семенников, а также снижения концентрации тестостерона уровень ГАМК и глутаминовой кислоты между 12-й и 18-й неделями наблюдения был резко сниженным. Поз-
же, в период максимальной инволюции репродуктивных органов хомяков, концентрация ГАМК значительно повышалась, тогда как уровень глутаминовой кислоты оставался сниженным. Активность ГДК в семенниках начинала возрастать, начиная с 14-й недели содержания животных в подобных экспериментальных условиях. Авторы считают, что изменение содержания ГАМК в семенниках животных, репродуктивная функция которых зависит от длительности фотопериода, может быть важным ауто- или паракринным модуляторным сигналом для регуляции процессов стероидогенеза в семенниках [33].
Щитовидная железа
Исследование компонентов ГАМК-системы и ее роли в функционировании щитовидной железы проводили в очень ограниченном объеме и только на первых этапах изучения ненейрональной ГАМК (последние работы датированы 1981 г.). Показано, что в щитовидной железе ГАМК может синтезироваться с помощью ГДК и метаболизироваться с помощью ГАМК-Т. Концетрания аминокислоты, как и величина активности ферментов в железе, низка [34].Специфическая система высокоаффинного транспорта ГАМК по своим характеристикам подобна таковой в мозге, локализуется в основном на мембранах фолликулярных и отсутствует на мембранах С-клеток и тучных клеток. In vivo ГАМК не влияла на синтез тиреоидных гормонов и содержание йодида в железе. В то же время при гипотиреозе активность ГАМК-Т повышалась за счет увеличения скорости реакции, тогда как при гипертиреозе она была сниженной, одновременно с этим имела место интенсификация высокоаффинного захвата аминокислоты. Существование активной системы транспорта ГАМК, модуляция ее активности, как и активности ферментов обмена аминокислоты, позволили авторам предположить, что ГАМК может играть определенную роль в функционировании щитовидной железы [37, 38]. Сведения о ГАМК-Р щитовидной железы в литературе отсутствуют.
Тимус
О присутствии ГАМК в тимусе известно давно [34], но первые сведения о ферментах ее обмена в железе появились лишь в последние годы. Синтез ГДК происходит в специализированных клетках железы человека [67], а в тимусе 7-дневных мышат со спонтанным диабетом установлена экспрессия только одного из изоферментов — ГДК67, который считают потенциальным аутоантигеном [66]. Применение биохимических и гистоэнзиматических методов позволило выяснить, что большая часть активности ГАМК-Т в тимусе крыс локализована в стенках кровеносных и лимфатических сосудов, а меньшая ассоциируется с субкапсулярной и медуллярной частью паренхимы. В условиях стимуляции интерлейкином иммунного ответа активность ГАМК-Т повышалась в различных структурах тимуса [23]. В тимусе человека показана низкая экспрессия ГАМКА-Р-ассоциированных белков [79].
Среди возможных функций ГАМК в тимусе одновременно с нейромедиаторной [22] рассматривают и значение молекулы в осуществлении связи между функциями нервной и иммунной систем [24]. Роль ГАМК в эндокринной функции тимуса неизвестна.
Гипофиз
Известно, что ГАМК играет важную роль в регуляции секреции гормонов гипофиза, однако характерные детали функционирования собственно медиаторной системы в гипофизе исследованы недостаточно. Количественно ГАМК определяется в передней, промежуточной и задней долях, но синтезируется, по данным ранних исследований, исключительно в двух последних [9, 77]. Величина активности ГДК составляет лишь около 10% от активности фермента в мозге [56]. В то же время активность ГАМК-Т в передней доле превышает таковую как в иных долях гипофиза, так и в гипоталамусе. Эти биохимические различия содержания ГАМК и активности ферментов ее обмена в разных долях гипофиза связаны с существованием неодинаковых морфофункциональных связей между ними и гипоталамусом, а отсутствие в передней доле ГДК позволило сделать вывод о том, что аденогипофиз секвестирует ГАМК из крови.
Результаты исследований последних лет, однако, свидетельствуют о том, что в клетках аденогипофиза, секретирующих гормон роста, как и во всех эндокринных клетках промежуточной доли гипофиза, экспрессируется ГДК67. С помощью им- муноэлектронной микроскопии установлено, что экспрессия этих белков в соматотропах происходит во внутриклеточных органеллах, запасающих гормон. В клеточной культуре GH3, продуцирующей гормон роста, были идентифицированы гены, кодирующие синтез ГДК^ [56].
Следовательно, существуют 3 источника ГАМК в гипофизе: транспорт из гипоталамуса по системе портальных сосудов в переднюю долю, прямая гипоталамическая иннервация задней и промежуточной долей и синтез из глутамата, который наблюдается не только в двух последних, но и в некоторых клетках передней доли [56]. Следует также отметить, что гипофиз интенсивно накапливает и аминокислоту из периферической крови, в случае когда уровень ее в циркуляции повышен [50]. При изучении процесса интернализации меченой ГАМК в гипофизе крыс было показано, что лактотропы и соматотропы являются единственными клетками аденогипофиза, в которых накапливается меченая аминокислота. При этом метка локализуется в различных внутриклеточных органеллах: плазматических мембранах, комплексе Гольджи, митохондриях и секреторных гранулах [29].
В гипофизе присутствуют все 3 типа ГАМК-Р, локализующиеся (по крайней мере ГАМКа- и ГАМКВ-Р) на всех типах клеток гипофиза и играющие важную роль в регуляции секреции всех гипофизарных гормонов. Выяснение тонких деталей локализации субтипов ГАМК-Р, их структуры и механизмов регуляции — задача дальнейших исследований. В настоящее время известно, что фос-
формирование р2- и р3-субъединиц ГАМКа-Р является важнейшим моментом в проявлении тормозного действия протеинкиназы G на функцию ГАМКа-Р в культуре меланотропов промежуточной доли гипофиза [19]. Протеинкиназа G вовлечена и в механизм влияния оксида азота на функцию ГАМКД-Р'в железе [20].
Фармакологические и функциональные характеристики ГАМКВ-Р гипофиза крыс подобны таковым в мозге [53]. По одним данным, в гипофизе экспрессируется только длинная субъединица ГАМКВ-Р [11], по другим — обе [12]. Активация ГАМКВ-Р гипофиза ингибирует секрецию гормонов in vitro. В основе такого действия лежит отрицательное взаимодействие между ГАМКВ-Р и Са2+- каналами, опосредованное G-белками [53]. Существуют возрастные, а также зависящие от пола модуляции уровня ГАМКВ-Р в передней доле гипофиза. Так, количество связывающих мест у 4-дневных самок существенно выше, чем у самцов этого же возраста, тогда как аффинность их одинакова в гипофизе крыс разного пола. Экспрессия ГАМКв,а-Р и ГАМКВ1в-Р уменьшается в гипофизе самок, начиная с 4-го дня после рождения и до взрослого возраста, при этом экспрессия ГАМКВ1а- Р на ранних стадиях развития значительно превышала таковую ГАМКВ|в-Р. Экспрессия ГАМКВ2-Р незначительна. У самцов характер изменений экспрессии ГАМКВ1а-Р был аналогичен таковому у самок, хотя интенсивность ее была ниже, чем у самок на ранних стадиях развития. Экспрессия ГАМКВ]Ь- Р и ГАМКВ2-Р в гипофизе самцов очень низка [12].
В гипофизе морских свинок и крыс экспрессируются обе р-субъединицы ГАМКС-Р, мРНК рг субъединицы в гипофизе крыс превалирует. При использовании антител, специфичных к субъединице ГАМКС-Р, показана совместная клеточная локализация р,-субъединицы и ТТГ. Предполагают, что ГАМКС-Р принимают активное участие в регуляции секреции ТТГ и что структура и биохимическая регуляция этих рецепторов в гипофизе отличаются от таковых в сетчатке, где они были впервые идентифицированы [15].
С помощью современных методов исследования было показано, что во всех эндокринных клетках промежуточной доли гипофиза, а также соматотро- пах передней доли локализуется везикулярный ГАМК-Тр [56]. Изучение процессов регуляции транспорта ГАМК показало, что интерлейкин-6 не влиял на высвобождение ГАМК из задней доли гипофиза, однако повышал интенсивность этого процесса в условиях предварительной деполяризации мембран клеток. Эффект интерлейкина-6 снижался при инкубации ткани с ингибитором циклооксигеназы, что свидетельствует в пользу медиаторной роли простагландинов в процессе высвобождения ГАМК [28].
По последним данным, по крайней мере 2 типа клеток, а именно клетки промежуточной доли, секретирующие пропиомеланокортин, и соматотропы передней доли гипофиза, способны синтезировать, запасать и секретировать ГАМК. Данные о совместной локализации ГАМК, фермента ее синтеза, ГАМК-Тр, а также гормона роста в одних и тех же субклеточных органеллах позволили предположить, что ГАМК, образовавшаяся в соматотропах, может контролировать высвобождение гормона по паракринному типу регуляции, а присутствие ГАМК-Р на мембранах этих клеток свидетельствует и о возможном аутокринном характере контроля [56]. Сформулирована концепция многоуровневой ГАМКергической регуляции секреции гормонов гипофиза: 1) гипоталамический непрямой механизм, опосредованный ГАМКергическим контролем секреции гипоталамических рилизинг-факто- ров; 2) гипоталамический прямой с вовлечением ГАМК, выделившейся из аксонов нейронов гипоталамуса непосредственно в задней и промежуточной долях; 3) гипоталамический нейрогумораль- ный при участии ГАМК, которая поступает в аденогипофиз по системе портальных сосудов; 4) па- ра/аутокринный с участием ГАМК, которая синтезируется и высвобождается собственно в эндокринной клетке гипофиза. Для решения вопроса о возможном существовании последнего механизма и в других клетках гипофиза необходимы дальнейшие исследования.
Следовательно, метаболизм и транспорт ГАМК, как и структура ее рецепторов в эндокринных железах значительно отличаются от аналогичных показателей в мозге. Возможно, это является особенно важным для реализации тех функций, которые осуществляет ГАМК в указанных органах. Наряду с нейромедиаторной следует отметить роль аминокислоты в регуляции ряда внутриклеточных и мембранных процессов, участвующих в синтезе и секреции гормонов. Выяснение всех аспектов этой проблемы приблизит решение вопроса о возможной коррекции нарушений функции эндокринных желез препаратами, влияющими на активность ГАМКергической системы
References[MuutyHina Т. М., Кононенко В. Я., MiKoiua О. С., Тронь- ко М. Д. И Ф1зюл. журн. — 1994. — N 3. — С. 9-15.][Muiuynina Т. М., Кононенко В. Я., Рибаков С. Й. // Ендок- ринолопя. — 2000. — Т. 5, N 1. — С. 16-21.][Muiuynina Т. М., Кононенко В. Я. // Пробл. эндокринол. —2001- N 3. - С. 33-36.][Muiuynina Т. М., Калииченко О. В. // Ф1зюл. журн. — 2001.Т. 47, N 5. - С. 47-53.][Aanesen A., Fried G., Anderson Е., Gottlieb С. // Biol. Reprod.1996. - Vol. 54, N 4. - P. 841-846.][Adeghate E., Ponery A., Pallet D., Singh J. // Tissue Cell. —2000- Vol. 32, N 3. - P. 266-274.][Ahnerthilger G., Stadtbaumer A., Strubing C. et al. // Gastroen¬terology. - 1996. - Vol. 110, N 5. - P. 1595-1604.][Akinci M., Schofield P. // Neurosci. Res. — 1999. — Vol. 35, N 2. - P. 145-153.][Apud J., Cocchi D., Locatelli Y. et al. // Psychoneuroendo- crinology. — 1989. — Vol. 14, N 1—2. — P. 3-17.][Beales P., Hawa M., Williams A. et al. // Acta Diabetol. — 1995. - Vol. 32, N 1. - P. 53-56.][Belley M., Sullivan R., Reeves A. et al. // Bioorg. Med. Chem.1999. - Vol. 7, N 12. - P. 2697-2704.][Bianchi M., Rey-Roldan E., Better B. et al. // Neuropharma¬cology. - 2001. - Vol. 40, N 2. - P. 185-192.][Borboni P.. De Steforpus P., Fusco A. et al. // Diabetes. — 1992. - Vol. 41. - Suppl. 1. - P. 46.][Bouix O., Reynier M., Guintrandhugret R., Orsetti A. // Horm. Metab. Res. -1995. - Vol. 27, N 5. - P. 216-220.][Boue-Grabot E., Taupignon A., Tramu G., Garret M. // Endo¬crinology. — 2000. — Vol. 141. — P. 1627-1632.][Brice N., Varadi A., Ashcroft S., Molnar E. // Diabetologia. —2002- Vol. 45, N 2. - P. 242-252.][Busik J., Nakamura M., Abe Y. et al. // Brain Res. — 1996. — Vol. 739, N 1-2. - P. 97-103.][Callahan H., Cottrell G., Hather N. et al. // J. Physiol. — 1986. - Vol. 281. - P. 117.][Castel H., Louiset E., Anouar Y. et al. // J. Neuroendocrinol.2000. - Vol. 12, N 1. - P. 41-52.][Castel H., Jegou S., Tonon M., Vandry H. // Endocrinology. — 2000. - Vol. 141, N 9. - P. 3451-3460.][Castelli V., Ingianni A., Stefanini E., Gessa G. // Life Sci. —1999- Vol. 64, N 15. - P. 1321-1328.][Cavallotti D., Artico M., De Sand S., Cavallotti C. // Hum. Im¬munol. - 1999. - Vol. 60, N 11. - P. 1072-1079.][Cavallotti D., Artico M., Cavallotti C. // Int. J. Immunophar- macol. - 2000. - Vol. 22, N 9. - P. 719-728.][Cavallotti D., Artico M., D’Andrea V, Cavallotti C. // Hum. Immunol. - 2000. - Vol. 61, N 7. - P. 697-704.][Chessler S., Lernmark A. // J. Biol. Chem. — 2000. — Vol. 275, N 7. - P. 5188-5192.][Cram D., Faulner-Jones B., Kun J., Harrison L. // Endocrinol¬ogy. - 1995. - Vol. 136, N 3. - P. 1111-1119.][Delasheras M., Valcarcel A., Peres L. // Biol. Reprod. — 1997.Vol. 56, N 4. - P. 964-968.][De Laurentiis A., Pisera D., Lasaga M. et al. // Neuroimmu- nomodulation. — 2000. — Vol. 7, N 2. — P. 77-83.][Duvilanski D., Perez R, Seilicovich A. et al. // Tissue Cell. —2000- Vol. 32, N 4. - P. 284-292.][Eaton M., Martinez M., Normally S. et al. // Cell. Transplant.2000. - Vol. 9, N 5. - P. 637-656.][Eranzoni M., Sapei M., Beltramo M., Calas A. // Neuroendo¬crinology. — 1990. — Vol. 52. — Suppl. 1. — P. 51.][Frungieri M., Gonzalezcalvar S., Chabdrashekar V. et al. // Int. J. Androl. - 1996. - Vol. 19, N 3. - P. 164-170.][Frungieri M., Gonzalezcalvar S., Calandra R. // Int. J. Androl.1996. - Vol. 19, N 3. - P. 171-178.][GABA-Ergic Mechanisms in Mammalian Periphery / (Eds S. Erdo, N. Bowery. — New York, 1986.][GABA Outside the CNS / Ed. S. Erdo — New York, 1992.][Gaskins H., Baldeon M., Selassie L., Beverly J. // J. Biol. Chem. - 1995. - Vol. 270, N 51. - P. 30286-30289.][Gebauer H, Crailsheim K. // Acta Endocrinol. — 1981. — Vol. 97. - Suppl. 243. - P. 58.][Gebauer H, Pabst A. // Cell Tissue Res. - 1981. - Vol. 220, N 4. - P. 873-879.][Gonzalez M., Oset-Gasque M., Castro E. et al. // Neuro¬science. — 1992. — Vol. 47, N 2. — P. 487-494.][He X., Hu J., Wu Q. et al. // Biochem. Biophys. Res. Com¬mun. - 2001. - Vol. 283, N 1. - P. 243-247.][Hedblom E., Kirkness E. // J. Biol. Chem. — 1997. — Vol. 272, N 24. - P. 15246-15350.][Hu J., He X, Yan Y. Ц Cell Res. - 2000. - Vol. 10, N 1. - VP. 51-58.][Hu J., Yan Y. // Cell Res. - 2002. - Vol. 12, N 1. - P. 33- 37.][Iwasa K, Oomori Y., Tanaka H. // Arch. Histol. Cytol. —1998- Vol. 61, N 4. - P. 373-382.][Jin X., Huang F., Yang N. et al. // Cell Res. — 2001. — Vol. 11, N 2. - P. 161-163.][Jousselin-Hosaja M., Venault P., Tobin C. et al. // Behav. Brain Res. - 2001. - Vol. 121, N 1-2. - P. 29-37.][Katoh J., Taniguchi H., Ogura M. et al. // Experientia. — 1995. - Vol. 51, N 3. - P. 217-219.][Katoh J., Taniguchi H.. Kasuga M. // Life Sci. — 1995. — Vol. 56, N 21. - P. 1799-1805.][Kitayama S., Morita K, Dohi T., Tsujimoto A. // Biochim. Bio¬phys. Acta. - 1990. - Vol. 1053, N 2-3. - P. 189-194.][Kuroda E., Watanabe V., Tamayama T., Shimada M. 11 Mi- crosc. Res. Tech. — 2000. — Vol. 48, N 2. — P. 116-126.][Law R., Stafford A., Quick M. // J. Biol. Chem. — 2000. — Vol. 275, N 31. - P. 23986-23991.][Llona I. // Neurochem. Int. — 1995. — Vol. 27, N 3. — P. 219-226.][Lux-Lantos V., Becu-Villalobos D., Bianchi M. et al. // Neu¬roendocrinology. — 2001. — Vol. 73, N 5. — P. 334-343.][Ma Y„ Hu J., Zhou X. et al. // Cell Res. - 2000. - Vol. 10, N 1. - P. 59-69.][Malaisse-Lagae E, Giroix M., Malaisse W. // Med. Sci. Res.1992. - Vol. 20, N 13. - P. 489-490.][Mayerhofer A., Hohne-Zell B., Gamel-Didelon K. et al. // FASEB. J. - 2001. - Vol. 15, N 6. - P. 1089-1091.][Nagamatsu S., Nakamichi Y, Watanabe T. et al. // J. Cell Sci.2001. - Vol. 114. N 1. - P. 219-227.][Nakamura M. // Jpn. J. Vet. Res. - 1995. - Vol. 43, N 1. - P. 43.][Ohara-Imaizumi M., Nakamichi Y., Ozawa S. et al. // Bio¬chem. Biophys. Res. Commun. — 2001. — Vol. 283, N 5. — P. 1025-1030.][Oset-Gasque M., Castro E., Gonzalez M. // J. Neurosci. Res.1990. - Vol. 26, N 2. - P. 181-187.][Parramon M., Gonzalez M., Oset-Gasgue M. // Br. J. Pharma¬col. - 1995. - Vol. 116, N 2. - P. 1875-1881.][Parramon M., Gonzales M., Herrero M., Oset-Gasque M. // J. Neurosci. Res. — 1995. — Vol. 41, N 1. — P. 65-72.][Petersen J., Russel S., Marshall M. // Diabetes. — 1993. — Vol. 42, N 3. - P. 484-495.][Petersen J., Rimvall K., Jorgensen P. et al. // Diabetologia. —1998- Vol. 41, N 5. - P. 530-535.][Pleau J., Esling A., Van Acker C., Dardenne M. // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 1996. — Vol. 254, N 3. — P. 747-753.][Pleau J., Esling A., Geutkens S. et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2001. - Vol. 283, N 4. - P. 843-848.][Pugliese A., Brown D., Garza D. et al. // J. Clin. Invest. —1999- Vol. 107, N 5. - P. 555-564.][Quatraro A., Consoli G., Stante A. et al. // Acta Diabetol. — 1986. - Vol. 23, N 1. - P. 23-28.][Reddy S., Elliott R., Poole C., Ross J. // Gen. Compar. Endo¬crinol. - 1997. - Vol. 106, N 3. - P. 301-309.][Rorsman P., Ashrroft F., Berggren P. // Biochem. Pharmacol.1991. - Vol. 41, N 12. - P. 1783-1790.][Saraviafemandez E, Faveeuw C., Blasquezbulant C. et al. // Endocrinology. - 1996. - Vol. 137, N 8. - P. 3497-3506.][Sha L., Miller S., Szurzewski J. // Am. J. Physiol. — 2001. — Vol. 280, N 3. - P. G324-G331.][Shi Y, Kanaani J., Menard-Rose V. et al. // Am. J. Physiol. — 2000. - Vol. 279, N 3. - P. E684-E694.][Smismans A., Schuit E, Pipeleer D. // Diabetologia. — 1997.Vol. 40, N 12. - P. 1411-1415.][Testore G., Cravanzola C., Bedino S. // Int. J. Biochem. —2000- Vol. 31, N 7. - P. 777-786.][Tillakaratne N., Medina-Kauwe L., Gibson R. // Comp. Bio¬chem. Physiol. - 1995. - Vol. 112, N 2. - P. 247-263.][Trabucchi M., Chartrel N., Pelletier G. et al. // J. Comp. Neu¬rol. - 2000. - Vol. 419, N 2. - P. 223-232.][Winnock E, Ling Z., De Proft R. et al. // Am. J. Physiol. —1999- Vol. 282, N 4. - P. E937-E942.][Xin Y., Yu L., Chen Z. et al. // Genomics. — 2001. — Vol. 74, N 3. - P. 408-413.][Yamamoto R., Yanagita T., Kobayashi H. et al. // J. Neuro¬chem. - 1997. - Vol. 68, N 4. - P. 1655-1662.]The authors declare that there are no conflicts of interest present.