Известно, что соматотропный гормон (СТГ) гипофиза является важнейшим стимулятором роста в раннем постнатальном периоде развития. Вместе с тем изучение регуляторных механизмов секреции этого гормона как в эксперименте, так

и в клинических условиях проводилось преимущественно на взрослых особях. Анализ отдельных работ, выполненных на клеточных культурах, свидетельствует о вероятной вариабельности ответа СТГ-секретирующих клеток гипофиза на регу-

5 Пробл. эндокринологии № 2

57

Рис. 1. Влияние ТРГ на секрецию СТГ в культурах гипофизарных клеток крыс разного возраста: неонатальных (/) и взрослых (//).

По вертикали — уровень СТГ в среде (в нг/мл). 1а, 2а. За, 4а - контроль. 16 и 36 — ТРГ (2 нг/мл), 1в и Зв ТРГ (10 нг/мл), 26 — ТРГ (40 нг/мл), 46 — ТРГ (100 нг/мл).

Длительность инкубации — 2—3 ч. н=5—12 в группе. Одна звездочка — р<0,05, две — р<0,01, три — р<0,02.

ляторные воздействия в зависимости от возраст- ного фактора [12, 16].

Ранее нами были обнаружены возрастные различия чувствительности культивируемых клеток гипофиза к регуляторам центрального происхождения при изучении влияния серотонина (данные в печати), мелатонина и агониста дофамина бромокриптина на скорость синтеза ДНК и суммарных белков в гипофизе [5], а также действия тиролиберина (тиреотропин-рилизинг-гормо- на; ТРГ) и соматостатина на секрецию пролактина [9]. С целью изучения развития реактивности соматотрофов в процессе онтогенеза в настоящей работе мы изучали изменения секреции СТГ культурами гипофизоцитов, полученных от крыс различного возраста, при воздействии ряда регуляторных факторов преимущественно нейрогормональной природы.

Материалы и методы

Опыты выполнялись на крысах линии Вистар: неонатальных (6—7-дневных) и взрослых (60—120-дневных) самках и самцах. Приготовление и выращивание первичных культур гипофизарных клеток ([6] в модификации [4]) и гомологичное радиоиммунологическое определение СТГ крыс |1| описаны ранее. Эксперименты с кратковременной (1,5— 3 ч) инкубацией проводили в 5—7-дневных первичных культурах гипофизарных клеток. Опыт с длительным воздействием начинали в 3-дневной культуре, а заканчивали на 6-й день культивирования. Использовали гормональные препараты следующих фирм: ТРГ, соматостатин (ССТ) и мелатонин — «Serva» (ФРГ); бромокриптин (СВ-154) — «Sandoz» (Швейцария); серотонин — «Reanal» (Венгрия). Результаты обработаны статистически с использованием /-критерия Стьюдента.

Результаты и их обсуждение

На рис. 1 представлены данные, свидетельствующие о стимулирующем влиянии различных концентраций ТРГ на секрецию СТГ в первичных культурах гипофизарных клеток неонатальных, но не взрослых крыс. В табл. 1 демонстрируется менее выраженная реакция соматотрофов неонатальных крысят на ССТ в сравнении с клетками взрослых животных. Характерно, что при использовании более высоких концентраций этих пептидов возрастные различия реактивности соматотрофов к ТРГ сохраняются, а к ССТ — сглаживаются (см. рис. 1 и табл. 1).

Серотонин не оказывал заметного влияния на секрецию СТГ гипофизарными клетками крыс разного возраста (табл. 2).

При длительной (24 ч) инкубации агонист дофамина бромокриптин и мелатонин достоверно подавляли секрецию СТГ только в группе неонатальных крысят, хотя в культуре гипофизарных клеток взрослых животных имелась тенденция к ингибирующему влиянию бромокриптина и мелатонина на секреторную активность соматотрофов (рис. 2).

Поскольку у неонатальных животных установлены незрелость лактотропной функции, обусловленная, видимо, низким содержанием лактотро- фов в ткани аденогипофиза [9, 15], а также высокий процент ДНК-синтезирующих соматотрофов [11], мы считаем возможным предположить, что в обнаруженном ранее ингибирующем влиянии бромокриптина на синтез ДНК и суммарных белков в культуре гипофизарных клеток неонатальных крысят [5] наибольший вклад вносит воздействие этого дофаминергического агониста на со- матотрофы. Результаты, полученные нами в отношении другого нейрогуморального агента — мелатонина, подтверждают это предположение, ибо только в культуре гипофизарных клеток неонатальных крысят мелатонин способен достоверно подавлять как синтез ДНК в суммарной

Таблица 1

Действие ССТ на секрецию СТГ в культурах гипофизарных клеток крыс разного возраста (длительность инкубации 2—3 ч)

Примечание. р<0,001 во всех случаях. Здесь и в табл. 2 в скобках — число наблюдений в группе.

Таблица 2

Примечание. р>0,05.

Рис. 2. Влияние бромокриптина (СВ-154) и мелатонина на секрецию СТГ в культурах гипофизарных клеток крыс разного возраста: неонатальных (/) и взрослых (//).

По вертикали - уровень СТГ в среде (в нг/мл). « — контроль, б, CB-L54 в концентрациях 10 8 и 10 М; г, д— мелатонин в дозах 10 ' и 10 6 М.

Длительность преинкубации — 48 ч, инкубации—24 ч. /1=5-10 в группе. Одна звездочка — р<0,05, две—р<0,01 по сравнению с соответствующим контролем.

популяции клеток, так и секреторную активность соматотрофов.

Интересно провести сопоставление данных, полученных в отношении реакций соматотрофов и лактотрофов крыс разного возраста на ТРГ и соматостатин. Согласно нашим результатам, представленным *в настоящей работе и опубликованным ранее [9], а также данным других авторов [12, 14, 16], соматотрофы и лактотрофы неонатальных крысят ближе по свойствам к сома- томаммотрофам, так как демонстрируют повышенную реактивность секреции пролактина к ингибирующему воздействию ССТ, а освобождения СТГ — к стимулирующему влиянию ТРГ. Ингибирующее воздействие дофаминергического агониста бромокриптина на секрецию СТГ гипофизарными клетками только неонатальных крысят также подтверждает это предположение.

Ранее была описана теоретическая модель аденогипофизарного дифферона, в соответствии с которой соматомаммотрофы являются неотъемлемым его элементом [3]. Экспериментальные результаты, полученные нами [9], а также другими авторами [12, 14, 16], заставляют более внимательно отнестись к классификации типов паренхиматозных клеток аденогипофиза, особенно если речь идет о ранних стадиях постнатального развития, когда в аденогипофизе могут преобладать хромофобы и незрелые клетки с промежуточным фенотипом |15]. Такие представления подтверждаются электронно-микроскопическими исследованиями, проведенными в сочетании с иммуногистохимической процедурой и свидетельствующими о «неклассических» ультраструктур- ных характеристиках сомато- и лактотрофов неонатальных животных [13].

В предыдущих работах нами было установлено стимулирующее влияние ТРГ на секрецию инсулина и глюкагона в культурах клеток панкреатических островков новорожденных крысят [7], а также на биосинтез суммарных белков в клетках печени плодов крыс [9]. Дальнейшие исследования, проведенные в нашей лаборатории [2], показали отсутствие заметного влияния ТРГ на синтез суммарных белков в гепатоцитах 3-недельных крысят. Из результатов, полученных нами и другими авторами, следует, что в перинатальном периоде развития ТРГ обладает значительно более широким спектром биологического действия как на центральном регуляторном уровне, так и в периферических тканях. В этом отношении чрезвычайно интересно обнаружение переноса ТРГ от матери к сосункам через грудное молоко [10]. По-видимому, в регуляторные механизмы у крысят неонатального и сосункового периодов развития включается как эндогенный, так и материнский ТРГ.

В заключение хотелось бы отметить следующее: изучив сочетанное стимулирующее воздействие глюкокортикоида и норадреналина на секрецию СТГ, мы имеем основания утверждать (данные в печати), что для всесторонней оценки роли различных биорегуляторов в созревании соматотропной функции гипофиза необходимо изучение комбинированного влияния гормонов центрального и периферического генеза с учетом возраста животных-доноров гипофизарной ткани. В этом отношении первичные монослойные культуры гипофизарных клеток крыс предоставляют уникальные возможности, которые еще только начинают использоваться в экспериментальной работе.

Несомненный интерес в дальнейших исследованиях имело бы также изучение действия комбинаций гормонов периферических эндокринных желез (например, глюкокортикоидов и тиреоидных гормонов, эстрогенов и прогестинов, андрогенов) на соматотропную функцию, ибо оно позволило бы приблизиться к пониманию закономерностей созревания прямого сочетанного воздействия гормональных факторов на секрецию СТГ, регулируемую нейрогуморальными агентами.

Выводы

Представленные данные демонстрируют повышенную либо измененную чувствительность соматотрофов гипофиза неонатальных крыс к нейрогормональным регуляторам.