В настоящее время имеется значительный экспериментальный и клинический материал, свидетельствующий как о нейроэндокринном контроле функции лимфоидной ткани, так и об обратной связи в этой регуляции через медиаторы иммунокомпетентных клеток. Показано наличие специфических гормональных рецепторов на лимфоидных и макрофагальных клетках [6, 9], равно как и их способность продуцировать белково-пептидные гормоны [8, 10]. Установлено, что интерлейкины (ИЛ) могут регулировать функциональную активность желез внутренней секреции [14, 16]. С этих позиций хорионический гонадотропин (ХГ) представляет значительный интерес, поскольку его синтез ассоциирован не только с беременностью и опухолевым ростом [3], но и с процессами анти- гензависимой дифференцировки лимфоцитов [10]. Это во многом определяет процессы сосуществования двух генетически чужеродных организмов в период физиологически протекающей беременности и, вероятно, способствует «ускользанию» неопластических клеток от иммунной системы хозяина.

Целью работы было изучение влияния физиологических доз ХГ на способность интактных и активированных клеток селезенки формировать первичный иммунный ответ и участие в этом эндогенных простагландинов (ПГ).

Материалы и методы

Эксперименты выполнены на мышах-самках линии СВА и гибридах (CBAXC57BL/6)F|. ХГ («Profasi», Италия) в дозах 10 или 50 МЕ/мл, соответствующих его уровню во II, III и I триместрах беременности [17], вносили в макрокультуру спленоцитов мышей. Клетки селезенки (2-Ю7) культивировали в 4 мл питательной среды 199 в течение 60 мин при 37 “С, после чего их концентрировали (2-107/0,5 мл) центрифугированием. Затем клетки совместно с антигеном — эритроциты барана (2-10s) переносили внутривенно сингенным, летально облученным (219,3 мКл/кг) реципиентам. О результате судили по количеству антителообразующих клеток (АОК), формирующихся в селезенках реципиентов на 4—5-е сутки, методом локального гемолиза в геле агарозы по Ерне [11].

В специальных опытах в культуру спленоцитов совместно с ХГ или без него добавляли Т-лимфоцитактивирующие агенты, такие, как конканавалин А (КонА) («Caibiochem») в дозе 5 мкг/мл и рекомбинантный ИЛ-2 человека («Д1агно- стикум») в дозе 37 МЕ/мл, а также ингибитор циклооксигеназы — диклофенак натрия (вольтарен ПЛИВА, Загреб, Югославия, СИБА—ГЕЙГИ) в дозе 0,015 мг/мл [13].

Таблица 1

Влияние ХГ на способность интактных спленоцитов формировать АОК. Зависимость процесса от активности циклооксигеназы

Жизнеспособность клеток при культивировании, оцениваемая с помощью витального красителя, в среднем составляла 95 %.

В контрольных опытах спленоциты доноров культивировались в аналогичных условиях и затем совместно с антигеном переносились облученным реципиентам.

Результаты экспериментов обрабатывали по /-критерию Стьюдента. Во всех расчетах оперировали logic (lg) числа АОК.

Результаты и их обсуждение

В ходе исследований установлено, что ХГ в дозах, соответствующих среднему уровню концентрации гормона при физиологически протекающей беременности, статистически значимо угнетает способность лимфоцитов селезенки формировать адоптивный иммунный ответ. По-видимому, гормон нарушает механизмы антигеннезависимой дифференцировки В-лимфоцитов в предшественники АОК (ПАОК).

Ранее нами было показано [5, 12], что для реализации иммуномодулирующего действия ХГ на процессы клеточной кооперации необходимы эндогенные ПГ, основными продуцентами которых являются макрофаги [1]. Блокирование вольта- реном циклооксигеназы, которая превращает арахидоновую кислоту в ПГ, приводит к существенному снижению числа АОК (табл. 1). По-види- мому, эндогенные ПГ играют важную роль в процессах антигеннезависимой дифференцировки лимфоцитов в ПАОК. Внесение гормона в культуру клеток селезенки совместно с ингибитором циклооксигеназы выявило для низкой (10 МЕ/мл) и высокой (50 МЕ/мл) доз ХГ разные механизмы реализации, на первый взгляд, одинакового иммунодепрессивного эффекта. Как видно из табл. 1, доза 50 МЕ/мл на фоне ингибитора приобретает еще более выраженную иммуносупрессивную активность, в то время как доза 10 МЕ/мл утрачивает способность угнетать процессы формирования адоптивного иммунного ответа. Можно предположить, что в низкой дозе гормон либо «запускает» альтернативный трансмиттерный путь передачи сигнала при заблокированной циклооксигеназе, либо препятствует действию ингибитора. В высокой дозе ХГ, по-видимому, взаимодействует с более широким спектром клеток-мишеней, у одной из которых ХГ-зависимая супрессия не связана с активностью циклооксигеназы.

Несмотря на то что в используемой концентрации (5 мкг/мл) КонА индуцирует синтез Т-лим- фоцитами-хелперами ИЛ-2 [2], внесение его в суспензию спленоцитов не приводит к статистически значимому увеличению числа АОК у реципиентов (табл. 2). Культивирование клеток селезенки в присутствии КонА и ХГ (10 МЕ/мл) также не влияет на дифференцировку клеток в ПАОК, что в данном случае можно расценивать как КонА-зависимую отмену иммуносупрессивного эффекта низкой дозы гормона. В дозе 50 МЕ/мл ХГ статистически значимо угнетает способность иммуноцитов формировать АОК вне зависимости от того, присутствует в культуре лектин или нет.

Внесение в культуру клеток, содержащую КонА или КонА-|-ХГ (10 и 50 МЕ/мл), дополнительно ингибитора циклооксигеназы приводит к угнетению формирования АОК и, следовательно, нивелирует способность КонА отменять иммуносупрес- Влияние ХГ на способность спленоцитов формировать АОК на фоне воздействия КонА. Зависимость процесса от активности циклооксигеназы

Группа

Экспериментальное воздействие

Контроль

КонА (5 мкг/мл)

КонА4-ХГ(10 МЕ/мл)

КонА4-ХГ(50 МЕ/мл)

Контроль

Вольтарен (0,015 мг/мл)

Вольтарен 4- ХГ4- КонА

Вольтарен + Кон А 4-X Г (10 МЕ/мл)

Вольтарен + КонА4-ХГ (50

МЕ/мл)

lg числа АОК на 2-Ю7 клеток (в скобках абс. число АОК)

3,261 ±0.062(2177,7)

3,380±0,101 (2946,0) р2_1>0,05

3,205±0,048(1694,0) Рз__1>0.05; р3_2>0,05

3,077±0,081 (1416,0)

Рф_ l>0,05; p.|__ 2<0,05,

Рф_3>0,05

3,416±0,076 (2948,0) 2,859±0,079(865,4) Рб-5<0’001

3,078 ±0,089 (1438,0) Pf                      5<0,01; Ру    6>0,05

2,986±0,100(1251,6) р8_5<0,01; pg 6>0,05;

P8_7>0.05

2,936 ±0.106 (1 160,0) p9__5<0,002; py g>0,05; Pg_7>0.05; p9_ 8>0,05

сию низкой дозы гормона. Таким образом, как самостоятельный иммуносупрессивный эффект дозы 10 МЕ/мл, так и нивелирующий его эффект КонА в равной степени связаны с процессами синтеза ПГ спленоцитами. Высокая доза ХГ в отличие от низкой угнетает формирование АОК в присутствии КонА, и этот эффект сохраняется в условиях блокады синтеза эндогенных ПГ. Ранее нами было установлено, что в аналогичной дозе ХГ способен тормозить процессы индукции синтеза ИЛ-2 КонА-активированными спленоцитами [5].

Если КонА активирует Т-лимфоциты, то ИЛ-2, являясь ростовым фактором Т-клеток, отвечает за их дальнейшую пролиферацию и дифференцировку, а также экспансию клона комитирован- ных лимфоцитов-хелперов [4]. Поэтому внесение в культуру интактных иммунокомпетентных клеток экзогенного ИЛ-2 «включает» отличные от лектина механизмы клеточной дифференцировки.

Таблица 3

Влияние ХГ на способность спленоцитов формировать АОК на фоне воздействия ИЛ-2. Зависимость процесса от активности циклооксигеназы

Внесение ИЛ-2 в культуру спленоцитов не вызывает существенных изменений в способности клеток формировать первичный иммунный ответ. Культивирование клеток в присутствии ХГ (10 МЕ/мл) с экзогенным ИЛ-2, так же как и в случае с КонА, нивелирует иммунодепрессию, наводимую низкой дозой гормона. В то же время в дозе 50 МЕ/мл ХГ оказывает ярко выраженное костимулирующее действие в отношении ИЛ-2, активируя процессы антигеннезависимой дифференцировки спленоцитов (табл. 3). Данный эффект высокой дозы гормона не зависит от активности циклооксигеназы, несмотря на то что при блокаде этого фермента ИЛ-2 способен статистически значимо стимулировать процессы формирования АОК- Нивелирующее действие ИЛ-2 относительно малой дозы ХГ также не связано с активностью циклооксигеназы (см. табл. 3). Таким образом, воздействие на Т-клетки КонА или ИЛ-2 способно предотвращать депрессивное действие низкой дозы ХГ на процессы формирования ПАОК, однако механизмы этих нивелирующих воздействий различны.

Иммуномодулирующая активность высокой дозы ХГ в условиях влияния Т-активирующих молекул строго зависит от уровня и качества активирующего сигнала. Если сигнал афферентный (КонА), гормон тормозит процессы созревания клеток в ПАОК, если эфферентный (ИЛ-2) — активирует иммунный ответ. Как в первом, так и во втором случае, несмотря на разнонаправлен- ность эффектов ХГ (50 МЕ/мл) в этих условиях, они не зависят от синтеза эндогенных ПГ клетками селезенки.

Полученные результаты дают возможность по- новому интерпретировать ранее известные данные и открывают новый аспект физиологического действия ХГ. Так, синтез гормона антигенактивиро- ванными лимфоцитами в условиях смешанной культуры [10] можно интерпретировать как механизм повышения чувствительности клеток к ИЛ-2, что, по-видимому, значительно ускоряет процессы экспансии антигенактивированных хелперов. С этих позиций гОрмон можно рассматривать как лимфокин или дифференциройочный фактор для клеток, чувствительных к ИЛ-2. Поскольку эффекты ИЛ-2 носят плейотропный характер [4], а недавно установлено трофобластстимулирующее действие ИЛ при беременности [7], можно, учитывая универсальность механизмов взаимодействия гормонов с разными клетками-мишенями, считать ХГ костимулирующим фактором не толь- ко.для лимфоцитов, но и для клеток трофобласта.

Обсуждая значение ХГ как модулятора иммунных реакций во время беременности, хочется отметить дозовую зависимость иммунорегуляторного действия гормона. Наиболее выраженные и «разнообразные» эффекты ХГ дает в дозе, характерной для 7—10 нед беременности, когда на клетках плода и плаценты начинается экспрессия антигенов главного комплекса гистосовместимости [15]. Именно в этой дозе гормон угнетает функциональную активность иммунокомпетентных клеток, еще не вступивших в соприкосновение с антигеном. Те же лимфоциты, которым удалось распознать антиген и перейти к дальнейшей дифференцировке, напротив, стимулируются ХГ, т. е. гормон селекционирует лимфоидные клетки, чувствительные к ИЛ-2. Биологическое значение этого эффекта требует дальнейшего изучения.

Во II—III триместре беременности, когда плацента способна секретировать ряд новых, мощных иммунодепрессивных агентов, низкая концентрация ХГ (10 МЕ/мл), обладая иммуносупрессивной активностью, легко модулирует ее в зависимости от функционального состояния лимфоидных клеток. Это обстоятельство заслуживает особого внимания, поскольку раскрывает новые аспекты в понимании гормональной протекции плода как аллотрансплантата в различные сроки беременности.

Выводы