В исследованиях последних лет показана роль ряда химических веществ (бензол, пестициды) в механизмах нарушения функции и структуры нейросекреторных клеток (ИСК) гипоталамуса [1, 2, 8].

Однако работ, посвященных изучению состояния активности ферментных систем ИСК гипоталамуса при воздействии на организм пестицидов, в частности из группы фосфорорганических соединений (ФОС), в доступной литературе мы не встретили. Между тем препараты ФОС в настоящее время применяются в народном хозяйстве достаточно широко. В связи с этим в настоящей работе изучалась активность ферментов гликолиза— лактатдегидрогеназы (ЛДГ), цикла Кребса — сукцинатдегидрогеназы (СДГ), системы транспорта электронов — НАД- и НАДФ-диа- форазы, а также активность гидролитических ферментов — кислой и щелочной фосфатаз (КФ, ЩФ) в супраоптических (СОЯ) и паравентри- кулярных (ПВЯ) ядрах гипоталамуса в сопоставлении с морфофункциональными сдвигами в них при отравлении организма ФОС антио в дозе '/ю ДДбо- Отравление животных производили 25 % техническим препаратом антио через рот с помощью зонда 1 раз в сутки в течение 30 дней.

Материалы и методы

Для исследования активности ферментов нейросекреторных ядер (НСЯ) гипоталамуса кусочки фиксировали в жидком азоте сразу же после забоя животных. Срезы толщиной 9—10 мкм получали в криостате при —18 °C. Активность ферментов КФ и ЩФ определяли по метод; Берстона (9]. СДГ, ЛДГ, НАД- и НАДФ-диафораз — по Нахласу [3].

Для морфологических исследований гипоталамус фиксировали в жидкости Буэна с последующим обезвоживанием кусочков в спиртах возрастающей концентрации, затем заливали их в парафин. Для суждения о содержании нейросекреторного материала (НСМ) серийные срезы толщиной 6—7 мкм окрашивали паральдегидфуксином по Гомори Габу и хромовоквасцовым гематоксилином по Гомори. Проводили также кариометрию ядер СОЯ и ПВЯ. О степени различий полученных в опытах данных судили по критерию Стьюдента.

Результаты и их обсуждение

У животных, забитых на 8-й день отравления, наблюдалась высокая активность изучаемых ферментов, особенно СДГ, которая в СОЯ и ПВЯ гипоталамуса увеличивалась почти в 2—3 раза (рис. 1). Активность НАД и НАДФ также нарастала. Что касается гидролитических ферментов, то активность КФ и ЩФ в те же сроки отравления в СОЯ и ПВЯ снижалась, причем снижение активности КФ было более выраженным, чем ЩФ.

Видимо, повышение содержания СДГ, НАД, НАДФ в СОЯ и ПВЯ на 8-й день отравления ФОС может свидетельствовать о высоком уровне в НСК окислительных процессов и особенно окислительного фосфорилирования. По-видимому, в эти сроки отравления одновременно наблюдается

Исследования проводили на 72 белых беспородных крысах- самцах массой 180—220 г, содержавшихся в обычных условиях вивария. На 8, 20, 30-е сутки после отравления животных декапитировали.

Рис. 1. Изменение активности ферментов НСК переднего гипоталамуса у животных после отравления ФОС антио в дозе ’/ю ЛДбо-

Сплошная линия — СОЯ, пунктирная — ПВЯ. Показатели контроля приняты за 100. По оси ординат — степень изменений активности ферментов; по оси абсцисс — сроки отравления (в сут). Достоверность различий по сравнению с контролем: одна звездочка — р<0,05, две звездочки — р<0,01, три звездочки - р<0,001.

Объемы ядер (в мкм3) НСК, СОЯ и ПВЯ гипоталамуса у контрольных животных и у животных с различными сроками отравления ФОС антио в дозе '/ю ЛДбо (М±т)

Примечание. Достоверность различий по сравнению с контролем: одна звездочка — р<0,05, две звездочки—р< <0,01, три звездочки — р<0,001.

и активный выход из поврежденных НСК во внеклеточную среду лизосомальных гидролаз, которые имеют КФ [5, 7] и поступление ЩФ через поврежденные мембраны в капилляры, поэтому количество их снижалось.

Согласно данным литературы, в интактном состоянии в нейроцитах переднего гипоталамуса обнаруживается небольшое количество СДГ [4], и в то же время отмечается достаточно высокая активность КФ, гранулы которой заполняют всю цитоплазму НСК [10].

На 20-й день отравления наблюдалось снижение активности почти всех изученных ферментов. В то же время активность ЛДГ существенно не отличалась от контроля. Можно допустить, что такой характер изменений активности ферментов свидетельствует о нарастании в какой-то мере в эти сроки отравления интенсивности анаэробного пути окисления.

На 30-й день отравления отмечалась склонность к нарастанию активности гидролитических ферментов, количество их было несколько большим, чем у интактных крыс. В то же время активность СДГ, ЛДГ, НАД, НАДФ незначительно уменьшалась.

Что касается изменений морфологических и морфометрических показателей (см. таблицу, рис. 2), то у животных, забитых на 8-й день отравления, в НСК СОЯ и ПВЯ преобладали в основном увеличенные в размерах светло-окра-

%

7ОГ                                           °

6

К                   8                    20             30дней

I 1-/ ЕД-2

Рис. 2. Содержание различных типов ИСК в СОЯ (а) и ПВЯ (б) у контрольных (/() и отравленных ФОС животных (в % от общего числа клеток).

/ — светлые НСК; 2 — НСК с умеренным содержанием НСМ; <? — темные НСК; 4 — пикноморфные клетки. шивающиеся набухшие клетки с низким содержанием НСМ (клетки I и II типов), которые по классификации Поленова [6] относятся к клеткам с выраженной функциональной активностью. Через 20 сут в СОЯ и ПВЯ, наоборот, увеличивалось количество темно-окрашивающихся клеток с большим содержанием НСМ и уменьшенными в объемах ядрами (клетки III типа), что свидетельствует о понижении функциональной активности этих клеток (Поленов, 1971). На 30-е сутки наблюдалась тенденция к восстановлению нейросекреторной активности. При этом количество НСК I, II типов уменьшалось, а количество клеток III типа увеличивалось. Однако одновременно увеличивалось и количество дегенеративных пикно- морфных клеток (клетки IV типа).

По данным литературы (Поленов, 1971), высокое содержание нейросекрета может указывать как на интенсивный синтез, так и на задержку транспорта при низкой скорости его синтеза. Повышение содержания нейросекрета в клетках связано скорее с торможением его выведения, чем с повышением синтеза. Следовательно, выявленное уменьшение объема ядер и НСМ в НСК СОЯ и ПВЯ на 20-е сутки отравления может свидетельствовать о понижении их функциональной активности.

Таким образом, изучение активности окислительно-восстановительных и гидролитических ферментов крупноклеточных ядер переднего гипоталамуса при отравлении ФОС антио показало, что изменение активности ферментов коррелирует во времени и совпадает с морфофункциональными сдвигами НСК переднего гипоталамуса. Поэтому можно утверждать, что одним из патогенетических механизмов и возможных причин морфофункциональных сдвигов в НСК при отравлении организма пестицидами может быть нарушение активности ключевых ферментов цикла Кребса и анаэробного гликолиза, а также гидролитических ферментов.

Выводы