Направленный поиск веществ с выраженной эстрогенной активностью привел к созданию соединения, синтезированного в Эндокринологическом научном центре РАМН, — 11р-нитроокси- 9а-гидрокси-этинилэстрадиол-диацетата, получившего название ’’нистранол" [5, 6]. Изучению влияния нового эстрогена на связывание эстрадиола и прогестерона в тканях матки крыс посвящена данная работа.

Исследование способности новых эстрогенов конкурировать с эстрадиолом за связывание в тканях органов-мишеней in vitro и влиять на связывание эстрадиола и прогестерона in vivo дает возможность более эффективного скрининга эстрогенов, чем использование только классического метода in vitro [4].

Материалы и методы

Влияние нистранола на связывание эстрадиола и прогестерона в цитозольной фракции тканей матки крыс изучено на 72 крысах-самках массой 120—140 г, по 6 животных в каждой из исследуемых групп. Масляный раствор нистранола в дозе 0,1— 1 мг/кг вводили внутрибрюшинно на 7-й день после овариэк- томии по методу Я. Д. Киршенблата [3]. В качестве контроля служили животные, которым вводили чистый растворитель. Эвтаназию животных проводили под эфирным наркозом через 24 ч после инъекции препаратов.

Очищенные от жировой и соединительной ткани матки гомогенизировали в жидком азоте. Выделение цитозольной фракции и определение влияния препаратов на связывание эстрадиола и прогестерона в тканях матки крыс осуществляли по методу Л. С. Бассалык [1]. Белок определяли по методу О. Lowry [8]. Для статистической обработки данных эксперимента использовали непараметрический {/-критерий для непарных совокупностей Вилкоксона—Манна— Уитни [2].

Влияние эстрадиола, этинил эстрадиола и нистранола на связывание эстрадиола в цитозольной фракции тканей матки крыс через 1, 6, 24 и 48 ч после их однократного введения изучено на 100 неполовозрелых самках крыс массой 40—45 г методом лигандного обмена [7].

Способность нистранола конкурировать с эстрадиолом за связывание в цитозольной фракции тканей матки крыс in vitro

Таблица 1

Влияние эстрадиола, этинилэстрадиола и нистранола на связывание эстрадиола и прогестерона в цитозольной фракции тканей матки крыс (в фмоль/мг белка)

Примечание. Доза всех вводимых соединений составляла 0,1 мг/кг. * — достоверное отличие от контроля при р < 0,05.

изучали, используя метод конкурентного анализа [4]. В опытах использованы матки неполовозрелых крыс массой тела 35— 40 г. Показатель относительной конкурентной способности (ОКС) нистранола вычисляли как процентное соотношение между молярными концентрациями 17р-эстрадиола и конкурента, при которых [2, 4, 6, 7-3Н]-эстрадиол вытесняется из связи с его цитозольными рецепторами на 50%.

Результаты и их обсуждение

Данные о влиянии эстрадиола, этинилэстрадиола и нистранола на связывание эстрадиола и прогестерона (в фмоль/мг белка) в тканях матки крыс через 24 ч после однократного введения в дозе 0,1 мг/кг массы тела животного представлены в табл. 1. Показано, что однократное введение нистранола снижает в 2 раза уровень рецепторов эстрадиола в ткани матки. В то же время введение эстрадиола в дозе 0,1 мг/кг увеличивает содержание его рецепторов в цитозоле тканей матки в 3,2 раза.

Таким образом, нистранол действует на связывание эстрадиола в цитозольной фракции тканей матки подобно этинилэстрадиолу и противоположно эстрадиолу.

Нистранол, этинилэстрадиол и эстрадиол в изученных дозах увеличивали связывание прогестерона через 24 ч после однократного введения. Более выраженное влияние на этот показатель оказали этинилэстрадиол и нистранол, которые увеличивали его в 1,8 раза, тогда как эстрадиол — в 1,5 раза.

Данные о влиянии нистранола, эстрадиола и этинилэстрадиола на связывание эстрадиола в ци-

4

Влияние нистранола (0,1 мкг), эстрадиола (0,5 мкг) и этинилэстрадиола (0,1 мкг) на связывание эстрадиола в цитозольной фракции тканей матки неполовозрелых самок крыс через 1, 6, 24 и 48 ч после однократного введения.

По оси ординат — влияние эстрадиола (/), этинилэстрадиола (2) и нистранола (5) на связывание эстрадиола в цитозольной фракции ткани матки (в % от среднего значения в контрольной группе); по оси абсцисс — время после инъекции (в ч).

Таблица 2

ОКС эстрадиола, этинилэстрадиола и нистранола

тозольной фракции тканей матки неполовозрелых самок крыс через 1, 6, 24 и 48 ч после однократного введения представлены на рисунке. Через 1 ч после введения эстрадиола и этинилэстрадиола связывание меченого эстрадиола снижается на 75 и 25% соответственно, через 6 ч после введения этинилэстрадиола и нистранола этот показатель снижается на 50 и 80% соответственно. Связывание эстрадиола после введения нистранола и этинилэстрадиола не восстанавливается за 24 ч, тогда как после введения эстрадиола к этому сроку оно возрастает почти в 2 раза. Показанная ранее [5, 6] высокая утеротропная активность нистранола может быть обусловлена его способностью увеличивать скорость транслокации гормон- рецепторных комплексов в ядро, что также объясняет низкую концентрацию цитозольных рецепторов эстрадиола в тканях матки крыс, получавших нистранол.

Критерием способности нистранола конкурировать с эстрадиолом за связывание в цитозольной фракции тканей матки крыс in vitro служит показатель ОКС нистранола, представленный в табл. 2. Полученные результаты показали, что нистранол практически не конкурирует с эстрадиолом за связывание с его цитозольными рецепторами в отличие от этинилэстрадиола, мононитратом диоксипроизводного которого он является.

Выводы

При изучении потенциальных лекарственных препаратов с эстрогенной активностью необходимо использовать сочетание методов исследования in vivo и in vitro.