Атерогенный эффект сахаропонижающих препаратов группы сульфонилмочевины и его устранение с помощью папаверина хлорида

В 70-х годах Университетская группа по изу­чению диабета (UGDP, США) сообщила о возра­стании смертности от сердечно-сосудистых забо­леваний при лечении больных сахарным диабетом толбутамидом [27]. В ряде последующих работ эти данные не были подтверждены [12, 18, 24], в то же время результаты UGDP стимулировали исследования возможного сердечно-сосудистого эффекта препаратов сульфонилмочевины [11, 14, 19].

Недавно нами были получены предварительные данные о способностях препаратов сульфонилмо­чевины второй генерации в моделях in vitro и in vivo вызывать накопление внутриклеточного холестерина в культивируемых перитонеальных макрофагах мышей [4]. Следующим этапом на­шей работы явилась попытка устранения атеро­генного эффекта, вызванного сульфонилмоче- виной.

С этой целью был выбран папаверин, так как антиатерогенное действие этого средства было недавно выявлено в экспериментах (показана способность папаверина устранять атерогенный эффект p-адреноблокаторов) [1].

Материалы и методы

Для оценки влияния препаратов сульфонилмочевины и папаверина на атерогенность сывороток крови были обследо­ваны 9 больных сахарным диабетом II типа: 6 женщин и 3 мужчин в возрасте от 41 года до 52 лет. Средний уровень холестерина составлял 6,1 ±0,8 ммоль/л, триглицеридов — 2,1±0,7 ммоль/л, гликемия натощак — 8,7±1,8 ммоль/л. Длительность заболевания от 2 мес до 10 лет.

В исследовании были использованы препараты глипизида («Farmitalia Carlo Erbo», Милан, Италия) — минидиаб, глибенкламида («VEB Arzneimittelwerk», Дрезден, Герма­ния) — манинил, гликлазида (лаборатория Сервье, Фран­ция) — предиан и папаверина (Ташкентский химико-фарма­цевтический завод).

Трое больных получали манинил, трое —■ минидиаб и трое — предиан. Венозную кровь для исследования брали непосредственно перед приемом препарата, а также через

• и 4 ч после приема гликлазида (80 мг) или глипизида (5 мг) и через 4 и 6 ч после приема глибенкламида (5 мг). На следующий день больной принимал тот же пре­парат сульфонилмочевины в той же дозе и папаверин (40 мг). Кровь брали в те же часы. Для получения сыворотки кровь инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и центрифугировали в течение 15 мин при 1500 об/мин.

Перитонеальные макрофаги мышей получали от животных линии BALB/c по методу О. Adams. Выделенные клетки суспендировали в среде 199, содержащей 10% эмбриональ­ную телячью сыворотку (ЭТС), 2 ммоль/л глутамина, 100 ЕД/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2,5 мкг/мл фунгизона (все реактивы фирмы «Gibco», Вели­кобритания). Клетки инкубировали при 37 °C в течение

• ч в СО₂-инкубаторе.

Атерогенный эффект сывороток крови больных определяли по накоплению внутриклеточного холестерина при инкубации перитонеальных макрофагов в среде 199, содержащей 10 % исследуемой сыворотки крови больных в течение 3 ч. Контроль­ные клетки инкубировали в среде 199 с 10 % ЭТС без добав­ления сывороток крови.

. Непосредственное влияние препаратов на содержание внутриклеточного холестерина определяли при инкубации клеток в течение 3 ч в среде 199, содержащей 10 % ЭТС, а также препараты в указанных в таблице концентрациях.

Содержание внутриклеточного холестерина определяли ферментативным методом с помощью наборов фирмы «Boehringer Mannheim», Германия. Содержание клеточного белка измеряли по методу Lowry [21]. Достоверность разли­чий определяли с помощью двустороннего теста Стьюдента.

Результаты и их обсуждение

Глибенкламид, глипизид и гликлазид in vitro в концентрации 10~⁴ моль/л вызывали 1,5-кратное повышение содержания холестерина в культи­вируемых перитонеальных макрофагах мышей. Папаверин в концентрациях 10 ⁴—10^-8 моль/л не влиял на уровень внутриклеточного холесте­рина (см. таблицу).

Добавление папаверина в культуральную среду, содержащую 10⁴ моль/л глибенкламида, глипи-

Влияние препаратов сульфонилмочевины (СМ) и их комбинации с папаверином на содержание холестерина в культуре клеток

Примечание. Накопление холестерина в клетках, культивированное в среде 199 с 10 % ЭТС без добавления препаратов, принято за 100 %. Одна звездочка — достоверное накопление холестерина в клетках, р<0,05, две — достоверное снижение атерогенного эффекта СМ, р<0,05.

Влияние папаверина на фоне приема глибенкламида (а), глипизида (б) и гликлазида (в) на атерогенность, индуциро­ванную препаратами сульфонилмочевины.

Сплошная линия — препарат сульфонилмочевины; пунктирная — препарат сульфонилмочевнны + папавернн (I таблетка. 40 мг). Звездочка — достовер­ное повышение атерогенности. р<0,05. По оси ординат — атерогенность (в % от исходной); по оси абсцисс — время (в ч).

зида или гликлазида, приводило к достоверному снижению атерогенного действия препаратов суль­фонилмочевины. Этот эффект наблюдался при концентрациях папаверина 10“⁴,                10“ и

10“⁶ моль/л и отсутствовал при более низких концентрациях (см. таблицу). Максимальное сни­жение атерогенного действия препаратов сульфо­нилмочевины наблюдалось при концентрации папаверина 10“⁸ моль/л (практически полное его устранение).

Данные об антиатерогенном действии папаве­рина были подтверждены в экспериментах in vivo. Сыворотки крови 3 больных исходно не давали атерогенный эффект, у других 6 больных сыворот­ки крови обладали умеренно выраженными атеро­генными свойствами (накопление внутриклеточ­ного холестерина составило до 32%). Низкий уровень атерогенного потенциала можно объяс­нить тем, что данное исследование было про­ведено у больных, недавно заболевших сахарным диабетом.

На рисунке представлены данные о влиянии папаверина на атерогенный потенциал сыворотки крови, индуцированный приемом препаратов суль­фонилмочевины. Папаверин значительно снизил аторогенность, индуцированную приемом препара­тов сульфонилмочевины (манинилом, минидиабом и предианом). Необходимо отметить, что папаве­рин (1 таблетка, 40 мг) снизил атерогенный эффект препаратов сульфонилмочевины в сред­нем на 60 %, но не устранил его полностью.

В сообщениях UGDP была выдвинута гипотеза, что производные сульфонилмочевины могут отча­сти увеличивать смертность от сердечно-сосуди­стых заболеваний у больных сахарным диабетом [27]. Хотя был исследован только один препарат из класса сульфонилмочевины — толбутамид, это предположение может касаться и других препа­ратов данной группы ввиду их сходной хими­ческой структуры и характера действия [15]. Впо­следствии выводы UGDP подверглись существен­ной критике, поскольку дальнейшие исследова­ния не обнаружили превалирования смертности от сердечно-сосудистой патологии при приме­нении сульфонилмочевины по сравнению с други­ми методами лечения [2, 3, 9, 12, 18, 24, 25]. Это побудило многих авторов изучить возможный сердечно-сосудистый эффект производных сульфо­нилмочевины [11, 14, 17, 19, 20, 23]. Имеются дан­ные, что препараты сульфонилмочевины приводят к повышению артериального давления [8, 28] и увеличивают сократительную деятельность мио­карда у многих видов животных [6, 13]. Поло­жительный инотропный эффект толбутамида и других препаратов из группы сульфонилмоче­вины был продемонстрирован in vitro [19]. Ино­тропные эффекты увеличивают потребление кисло­рода миокардом [10] и способствуют расши­рению зоны экспериментального инфаркта мио­карда [22].

Е. Herman и соавт. [16] обнаружили, что толбутамид увеличивает токсичность сердечных гликозидов. Это явление может отчасти объяснить увеличение смертности от сердечно-сосудистой па­тологии у больных диабетом [26]. При приеме сульфонилмочевины обнаружено ухудшение тро­фики миокарда [5]. Другими авторами [7] показа­но увеличение в 2 раза частоты инфаркта миокарда при лечении сульфонилмочевиной по сравнению с лечением только диетой.

Окончательного мнения о влиянии препаратов сульфонилмочевины на развитие атеросклероза при сахарном диабете нет. Раннее влияние суль­фонилмочевины на содержание холестерина в культивируемых клетках не исследовалось. Нами в предыдущей работе показано атерогенное дейст­вие препаратов сульфонилмочевины в культуре перитонеальных макрофагов мышей [4]. Меха­низм такого атерогенного действия остается не­ясным. Возможно, он является рецепторопосре- дованным, и взаимодействие сульфонилмочевины и/или его активных метаболитов с культиви­руемыми клетками приводит к существенным из­менениям в регуляции липидного гомеостаза на клеточном уровне.

Недавно было показано, что папаверин может устранять атерогенный эффект некоторых лекар­ственных препаратов, например 0-адреноблокато- ров [1]. В настоящей работе мы попытались устранить с помощью папаверина атерогенный эффект сульфонилмочевины.

Если после приема глибенкламида, глипизида и гликлазида наблюдался рост атерогенности сы­вороток крови, ’то в результате одновременного приема препаратов сульфонилмочевины и папа­верина этот эффект значительно уменьшался. Сходные данные получены in vitro. Механизм наблюдавшегося антиатерогенного действия папа­верина не имеет достаточного теоретического и экспериментального обоснования. Можно пред­положить, что антиатерогенный эффект папаве­рина опосредуется через изменения в содержании цАМФ или ионизированного кальция в клетках, но эти предположения нуждаются в подтвержде­нии.

Вывод

Атерогенный эффект препаратов сульфонилмо­чевины второго поколения глибенкламида, глипи­зида и гликлазида снижается с помощью папа­верина как in vitro, так и in vivo.