Динамика тиреоидных гормонов у крыс при моделировании синдрома поликистозных яичников

Уровень гормонов (в нмоль/л) в крови нормальных и андрогенизированных белых крыс (М ± т)

Прогресс в анализе взаимосвязей репродуктивной системы с другими органными системами обусловил выделение новой предметной области медицины — инфлогенитологии [7]. В плане ин- флогенитологических исследований несомненный интерес представляет выявление координированных механизмов возможного развития патологического процесса в щитовидной железе при синдроме поликистозных яичников. Указанная патология относится к числу тяжелых видов гинекологических расстройств.

Полученные нами ранее материалы [3, 5, 7] свидетельствуют о том, что при моделировании синдрома поликистозных яичников у белых крыс в щитовидной желез возникает комплекс структурно-функциональных перестроек, ведущих к гипотиреоидному статусу. Поэтому ниже приводится динамика заинтересованных гормонов — трийодтиронина (Т₃), тироксина (Т₄) и прогестерона в сыворотке и плазме крови белых крыс при экспериментальном поликистозе яичников.

Материалы и методы

Работа проведена на белых крысах следующих возрастных групп: ювенильных (возраст 1,5 мес), пубертатных (2—2,5 мес) и взрослых половозрелых (6 мес).

Поликистоз яичников вызывали путем неонатальной андрогенизации самок белых крыс [4]. Новорожденным крысятам в течение 1-х суток вводили подкожно 0,5 мл тестостерона пропионата, что обеспечивало высокий процент реализации модели [1].

Концентрацию гормонов определяли с помощью конкурентного иммунометрического метода, основанного на усиленной люминесценции [8], используя набор "Амерлайт" фирмы-производителя "Амершам", рекомендуемый для щитовидной железы [2]. В основе метода лежит конкуреция между гормоном анализируемого образца и его аналогом, меченным пероксидазой хрена (конъюгат), за ограниченное количество мест связывания специфических к гормонам антител. Антитела к гормону присутствуют в жидкой фазе (реагент для определения) и в процессе инкубации связываются со вторичными антителами, которые сорбированы на лунках. Доля конъюгата, связанного на лунках к концу инкубации, обратно пропорциональна концентрации гормона в образце. По окончании инкубации несвязанный конъюгат удаляли отсасыванием и промывкой лунок при помощи промывочного устройства "Амерлайт".

Пероксидазную активность связанного конъюгата измеряли по реакции усиленной люминесценции. Для инициирования люминесценции в лунки добавляли сигнальный реагент, содержащий люминал и соль перкислоты как люминоген- ные субстраты и усилитель (замещенный фенол). Последний увеличивал длительность и интенсивность люминесценции. Световые сигналы считывали анализатором "Амерлайт". Измеряя количество связанного в присутствии стандарта конъюгата, определяли концентрацию гормона в образцах. Кровь получали при декапитации крыс, при этом нормальных половозрелых самок забивали в стадии диэструса. Необходимое количество сыворотки или плазмы составляло 0,025 мл (в дубликатах), диапазон измеряемых концентраций для Т₄ — 0—320 нмоль/л, для Т₃ — 0—12 нмоль/л, для прогестерона — От 160 нмоль/л.

Результаты и их обсуждение

Результаты проведенного исследования представлены в таблице. Исходный уровень Т₃ и Т₄ в сыворотке и плазме крови у неполовозрелых нормальных крыс в возрасте 1,5 мес оказался более высоким (Т₃—1,88 ± 0,09 нмоль/л, Т₄— 75,63 ± 1,06 нмоль/л), чем на последующих этапах онтогенеза. Это соответствует известным данным для человека. Уровень прогестерона в данной возрастной группе у крыс не определяли.

Выраженная динамика уровня изученных гормонов начиналась с активных гормональных перестроек, обусловленных периодом полового созревания животных. У нормальных крыс в возрасте 2—2,5 мес в яичниках появлялись единичные желтые тела. У андрогенизированных крыс этого возраста намечалась тенденция к формированию кистозных фолликулов яичников при отсутствии овуляции. Указанные процессы определяли уровень прогестерона в сыворотке и плазме крови, центрами биосинтеза которого, как известно, являются не только яичники, но и кора надпочечников. Содержание прогестерона у нормальных крыс (18,57 ± 3,76 нмоль/л) более чем в 2 раза превышало этот показатель у подопытных животных (8,11 ± 0,27 нмоль/л). Эта тенденция динамики прогестерона сохранялась в дальнейшем и у половозрелых крыс в возрасте 6 мес при значительном общем росте показателей в обеих группах.

Определенные закономерности отмечены и для гормонов щитовидной железы. В период полового созревания (крысы в возрасте 2—2,5 мес) наблюдали достоверное повышение уровня Т₃ у андрогенизированных крыс (1,2 ± 0,02 нмоль/л) по сравнению с нормальными (1,14 ± 0,02 нмоль/л). В дальнейшем у взрослых 6-месячных животных в состоянии устойчивой половозрелое™ показатели Т₃ в обеих группах выравнивались (см. таблицу).

Динамика Т₄ оказалась более выраженной. В ходе половой перестройки у крыс в возрасте 2— 2,5 мес показатели Т₄ были выше в группе подопытных животных (68,84 ± 0,86 нмоль/л), чем в контрольной (60,14 ± 0,75 нмоль/л). У половозрелых крыс в возрасте 6 мес соотношения гормона принципиально менялись. В группе андрогенизированных крыс концентрация Т₄ составляла 53,37 ± 2,14 нмоль/л и была статистически достоверно ниже, чем у нормальных крыс (63,57 ±1,81 нмоль/л).

Таким образом, работа с системой "Амерлайт” позволила выявить специфические закономерности динамики гормонов при синдроме поликистозных яичников у белых крыс. На фоне значительного дефицита прогестерона, характерного для указанного синдрома, обнаружены различия в концентрациях Т₃ и Т₄ в зависимости от статуса половозрел ости, что можно расценивать как результат компенсаторных перестроек. Конечным итогом явилось достоверное снижение содержания Т₄ в сыворотке и плазме крови у андрогенизированных животных с поликистозом яичников в возрасте 6 мес. Этот период онтогенеза у нормальных крыс соответствует репродуктивному расцвету. Отмеченная динамика гормонов логично связана с характером морфологических изменений щитовидной железы, свидетельствующих о переходе к состоянию гипотиреоза при выраженном развитии поликистоза яичников крыс.

Выводы

1. Суммарная оценка данных анализа содержания Т₃ и Т₄ в сыворотке и плазме крови белых крыс при моделировании поликистоза яичников, основанная на конкурентном иммунометрическом методе, свидетельствует о формировании гипотиреоза в ходе онтогенеза подопытных животных.
2. Уровень Т₃ и Т₄ в сыворотке и плазме крови белых крыс с синдромом поликистозных яичников в период, соответствующий пубертату, достоверно превышал аналогичные показатели у нормальных животных. В период половозрелое™ имело место выравнивание показателей Т₃ в опытной и контрольной группах животных и выраженное снижение уровня Т₄ у андрогенизированных самок крыс по сравнению с нормальными.
3. Содержание прогестерона у нормальных крыс значительно превышало этот показатель у животных с поликистозом яичников как в период полового созревания, так и в половозрелом состоянии.