Влияние препарата хорионического гонадотропина в регуляции функциональной активности антигеноспецифичных T- лимфоцитов-супрессоров

В период физиологически протекающей беременности плацента секретирует целый спектр биологически важных соединений, среди которых на первом месте по значимости стоит хорионический гонадотропин (ХГ) |2, 6]. Основной эффект этого гормона связан с лютеопротскцией и перестройкой эндокринного статуса организма беременной женщины |5, 10|. Высокая иммунорегулирующая активность ХГ во многом определяет взаимоотношения между иммунокомпетентными клетками матери и несущими признаки чужеродной генетической информации клетками эмбриона и плаценты [4, 6]. Нарушение этих взаимоотношений, как правило, носит фатальный характер для гестационного процесса в целом.

Известно, что все эффекторные функции лимфоцитов находятся под контролем Т-лимфо- цитов-супрессоров, уровень которых во время беременности существенно возрастает [4]. Ранее нами показана способность ХГ модулировать процессы генерации антигеноспецифичных Т- лимфоцитов-супрессоров в организме овариэк- томированных и некастрированных мышей-самок [3].

Задачей настоящей работы являлось изучение влияния ХГ на способность уже сформированных антигеноспецифичных Т-лимфоцитов-суп- рессоров реализовать иммунодепрессивный потенциал в отношении антителообразующих клеток (АО К).

Материалы и методы

Эксперименты проведены на половозрелых инбредных мышах-самках линии СВА массой 20-22 г, полученных из питомника “Рапполово” РАМН. Части мышей проводили двустороннюю овариэктомию под эфирным наркозом. Ова- риэктомнрованных животных использовали спустя месяц после операции.

Антигеноспецифичные супрессоры индуцировали у интактных самок, инъецируя внутрибрюшинно 4 ■ 10⁹ эритроцитов барана (ЭБ) или кролика (ЭК). Через 14 сут мышей забивали и выделяли клетки селезенки, где к этому времени накапливаются антигеноспецифичные Т-лимфоциты-супрессоры [121. Затем спленоциты переносили внутривенно сингенным реципиентам в концентрации 5 • 10⁷ ядросодержащих клеток (ЯСК) и одновременно иммунизировали ЭБ (2 • 10⁸). В качестве реципиентов использовали как интактных, так и овариэктомированных животных. На 5-е сутки от сингенного переноса и иммунизации в селезенках мышей-реципиентов определяли количество АОК методом локального гемолиза в геле агарозы |8|. Контролем служили иммунизированные ЭБ мыши, либо не получавшие внутривенной инъекции сплено- цитов-супрессоров, либо получавшие интактные сингенные клетки селезенки.

XI (Profasi, Serano, Италия) использовали в дозах 40 или 200 МЕ/мышь, что соответствует концентрации этого гормона во П-П1 и I триместрах беременности [2, 10]. При постановке эксперимента in vitro концентрация ХГ составляла 10 или 50 МЕ/мл при общем объеме одной макрокультуры 4 мл, т.е. соответствовала дозам, используемым in vivo. Контрольным животным инъецировали растворитель ХГ' — изотонический NaCl, который также использовался in vitro в контрольных культурах спленоцитов-супрессоров.

Эксперимент ставили в следующих вариантах: I) подкожное введение ХГ некастрированным и овариэктомированным реципиентам на 2-е и 4-е сутки от момента переноса спленоцитов-супрессоров; 2) предварительная часовая инкубация клеток-супрессоров с ХГ при 38”С в условиях макрокультуры (среда 199. концентрация клеток 5 • 10⁶ в 1 мл) и перенос этих клеток некастрированным мышам-самкам с последующей оценкой количества АОК в селезенках реципиентов.

Параллельно с экспериментальными сериями определяли принадлежность селезеночных клеток-супрессоров к Г- лимфоцитам и антигенную специфичность их функциональной активности. Для этого спленоциты-супрессоры, индуцированные супраоптимальной дозой ЭК. переносили реципиентам, иммунизированным ЭБ, а также фракционировали клетки селезенки допоров на колонке с найлоновой ватой |9|. Все результаты обрабатывали с помощью критерия Стьюдента. оперируя log₁₀ (lg) натуральных чисел.

Результаты и их обсуждение

Индукция клеток-супрессоров высокой дозой тимусзависимого антигена (ЭБ) кумулирует в селезенках мышей-доноров функционально активные клетки, которые в системе сингенного переноса достоверно супрессируют антителообразо- ванис, снижая выход АОК в 4 раза от оптимального уровня первичного иммунного ответа (см.

Характеристика функциональной активности спленоцитов- супрессоров в тесте угнетения АОК у сингенных реципиентов.

По вертикали — число АОК на 10⁶ ЯСК селезенки реципиентов; по горизонтали: 1 — первичный иммунный ответ; 2 — перенос интактных спленоцитов (5’ 10⁷) иммунизированным реципиентам; 3~ перенос спленоцитов-супрессоров (5- 10⁷>. индуцированных ЭК; 4 -• перенос спленоцитов-супрессоров (5* 10⁷). индуцированных ЭБ; 5— перенос Т-лимфоцитов-супрессоров (5* Ю⁷), индуцированных ЭБ. +- р < 0,001 относительно 1, 2, 3-й группы.

Таблица 1

Влияние ХГ на способность антигеноспецифичных клеток-супрессоров угнетать процессы формирования АОК у некастрированных мышей-самок (М ± т)

П р и м е ч а и и е . Здесь и в табл. 2 и 3: в скобках — натуральное число АОК.

Таблица 2

Влияние ХГ на способность антигеноспецифичных клеток-супрессоров угнетать процессы формирования АОК у овариэктомированных мышей-самок (М ± т)

рисунок). Клетки-супрессоры обладают выраженной антигенной специфичностью, поскольку генерированные другим корпускулярным антигеном (ЭК) не влияют на уровень АОК индуцированных ЭБ. Фракционирование клеток селезенки на колонке с найлоновой ватой, способной пропускать только Т-лимфоциты (9] и антигеноспецифичные Т-лимфоциты-супрессо- ры [1], демонстрирует принадлежность спленоцитов-супрессоров к Т-лимфоцитам (см. рисунок), что подтверждает заключение авторов используемой модели [12].

Таким образом, обсуждаемые ниже эффекты ХГ корректно интерпретировать как результат избирательного влияния гормона на данную субпопуляцию Т-лимфоцитов.

Реализация функциональной активности Т- лимфоцитов-супрессоров не зависит от того, к какому реципиенту, овариэктомированному или некастрированному, переносятся данные клетки (табл. 1, 2), т.е. гормональный фон кастрированных животных не оказывает значимого влияния на функцию клеток супрессоров.

Введение высокой (200 ME) и низкой (40 ME) доз ХГ некастрированным мышам-реципиентам клеток-супрессоров не оказывает существенного влияния на способность этих клеток угнетать формирование АОК. Можно лишь отметить статистически значимое снижение клеточности селезенки на фоне инъекций низкой дозы ХГ (см. табл. 1). У овариэктомированных животных гормон в дозе 200 ME достоверно угнетает активность Т-лимфоцитов-супрессоров, что проявляется в статистически достоверном увеличении количества АОК. Одновременно с этим инъекции низкой и высокой доз ХГ вызывают выраженное снижение количества ЯСК в селезенке реципиентов (см. табл. 2). Таким образом, мы вновь констатируем диссоциацию иммуномодулирующих эффектов ХГ в организме некастрированных и овариэктомированных животных. Этот феномен можно объяснить либо тем, что половые стероиды яичников, синтез которых активирует ХГ [5], нивелируют иммуномодулирующие эффекты гонадотропина, либо тем, что яичники в силу тропизма ХГ выступают в качестве специфического сорбента гормона, что выводит его из циркуляции в кровеносном русле. Подобные результаты ранее нами уже описаны |3, 4|. Для подтверждения возможности непосредственного гормонального действия на спленоциты-супрес- соры была проведена серия экспериментов с элементом предварительной обработки ХГ клеток- супрессоров in vitro. Результаты, полученные в данной серии, подтверждают способность ХГ вне зависимости от концентрации непосредственно угнетать функциональную активность Т-лимфоцитов-супрессоров. Важно отметить, что при такой постановке эксперимента клеточность селезенки реципиента не изменяется (табл. 3). Следовательно, ХГ, воздействуя непосредственно на спленоциты, не нарушает хоминг Т- лимфоцитов-супрессоров, несмотря на то, что in vivo гормон достоверно снижает клеточность селезенки. По-видимому, в целостном организме ХГ, помимо непосредственного угнетения активности антигеноспецифичных супрессоров, инициирует эмиграцию этих клеток за пределы селезенки.

Таблица 3

Влияние ХГ на функциональную активность антигеноспецифичных клеток-супрессоров в условиях in vitro (Л/ ± т)

Можно предполагать, что это действие гормона реализуется на уровне клеток стромы и приводит к снижению количества ЯСК в органе реципиентов при одновременном росте удельного количества АОК, определяемого при расчете показателя на К)⁶ клеток (см. табл. 2). Такое сочетание наблюдается только при инъекции высокой дозы ХГ овариэктомированным животным. Н;шичие полноценно функционирующих яичников препятствует данному эффекту гормона.

Представленные результаты согласуются с концепцией плацентарной иммунотрофики Вег- мана |11|. Так, ХГ, непосредственно угнетая функциональную активность антигеноспецифичных Т-лимфоцитов-супрессоров, с одной стороны, открывает путь к повышению синтеза блокирующих антител, с другой — предотвращает супрессию секреции лимфоцитами и макрофагами плаценты цитокинов, дающих мощные ростсти- мулирующие эффекты в отношении всего фето- плацентарного комплекса [7].

Выводы

1. Введение ХГ в дозах, характерных для различных триместров беременности, некастрированным самкам не оказывает действия на способность антигеноспецифичных Т-лимфоцитов- супрессоров реализовать иммунодепрессивные потенции.
2. Овариэктомия способствует проявлению иммуномодулирующего действия высокой дозы ХГ (200 МЕ/мышь), заключающегося в угнетении функции антигеноспецифичных Т-лимфоцитов-супрессоров.
3. Непосредственный контакт ХГ (10 или 50 МЕ/мл) с антигеноспецифичными Т-лимфоцитами-супрессорами угнетает их функциональную активность по отношению к процессам формирования АОК.
4. ХГ у кастрированных и некастрированных самок угнетает количество ЯСК селезенки, однако данный феномен может быть связан с эмиграцией антигеноспецифичных Т-лимфоцитов-супрессоров только в случае воздействия высокой дозы гормона на фоне овариэктомии.