Атерогенные свойства пероральных сахаропонижающих препаратов производных сульфонилмочевины

Применение пероральных сахаропонижающих препаратов в лечении инсулиннезависимого сахарного диабета (ИНСД) подверглось существенной критике с момента опубликования в 1970 г. первого сообщения Университетской группы по изучению диабета (УГИД, США), свидетельствующего о том, что эти вещества повышают смертность от сердечно-сосудистых заболеваний у больных сахарным диабетом [10]. В то же время другие исследования не подтвердили наблюдения УГИД [3, 11], поэтому определенного мнения о влиянии пероральных сахаропонижающих средств группы сульфонилмочевины на развитие атеросклеротических поражений сосудов не существует. Непосредственное влияние препаратов сульфонилмочевины на процессы атерогенеза не исследовалось.

Основным проявлением ранних атеросклеротических изменений является накопление липидов в клетках. Ранее было установлено, что сыворотка крови значительной части больных ИНСД способна увеличивать содержание холестерина в культивируемых перитонеальных макрофагах мышей, а также в гладкомышечных клетках непораженной интимы аорты человека, т. е. обладает атерогенными свойствами [1, 8], поэтому изучение влияния сахаропонижающих препаратов на атерогенность сывороток крови больных ИНСД представляет интерес.

В настоящей работе мы изучали влияние препаратов сульфонилмочевины второй генерации на содержание внутриклеточного холестерина в культивируемых перитонеальных макрофагах мышей, а также на атерогенные свойства крови больных, принимающих эти лекарственные средства.

Влияние препаратов сульфонилмочевины на содержание холестерина (в % от контроля) в перитонеальных макрофагах

* Достоверное (р<0,05) возрастание атерогенности.

Материалы и методы

Использованы глипизид и глибенкламид, любезно предоставленные фирмами Италии («Farmitalia Carlo Erba») и ФРГ («Boehringer Mannheim»), и соответствующие им пероральные сахаропонижающие препараты второго поколения — манинил («Veb arzneimittelwerk», Dresden) и ми- нидиаб («Farmitalia Carlo Erba»).

Для оценки влияния препаратов на атерогенность сывороток крови были обследованы 6 больных (2 мужчин и 4 женщины) с впервые выявленным ИНСД без проявлений ишемической болезни сердца. Возраст больных колебался от 36 до 53 лет, средний уровень холестерина составлял 5,4±1,3 ммоль/л, триглицеридов — 2,79±1,40 ммоль/л, среднесуточная гликемия — 6,4±1,5 ммоль/л. Длительность заболевания колебалась от 2 до 8 мес. Ранее больные не получали препараты сульфонилмочевины и/или инсулин. У 3 больных было проведено исследование с использованием манинила, у 3 — минидиаба. Кровь брали из локтевой вены утром натощак в количестве 5 мл, затем больной принимал препарат (5 мг) и через 1, 2, 4, 6, 8, 10 ч вновь брали кровь. После образования сгустка кровь центрифугировали, полученную сыворотку крови хранили при —20 °C в течение 3—4 дней до исследования.

Перитонеальные макрофаги выделяли от мышей линии BALB/C по методу [1]. После получения клеток перитонеальный смыв центрифугировали. Клеточный осадок ресуспен- дировали в ростовой среде 199, содержащей 10 % плодной телячьей сыворотки (FCS) с добавлением фунгизона — 2,5 мкг/мл, глутаминовой кислоты — 2 мМ, стрептомицина и пенициллина по 100 ЕД/мл. Клетки сажали в 24-гнездный микротест в концентрации 2-10^Б на 1 см^[1] и инкубировали при 37 °C в течение 3 ч в СО₂-инкубаторе в насыщенной водяными парами атмосфере (5% СО₂, 95% воздух).

Для оценки непосредственного влияния препаратов сульфонилмочевины и их фармакопейных аналогов на содержание внутриклеточного холестерина в перитонеальных макрофагах мышей клетки инкубировали в течение 3 ч в среде 199 с 10 % содержанием FCS с добавлением исследуемых препаратов в концентрациях 10“³, 10“⁴, 10“⁵, 10~⁶ мг на

• мл среды. Контрольные клетки культивировали в среде 199 с 10 % FCS без добавления препаратов.

Атерогенный эффект сывороток крови больных определяли по накоплению внутриклеточного холестерина при инкубации перитонеальных макрофагов в среде 199, содержащей 10% сывороток крови больных [9]. По окончании инкубации клетки промывали раствором Хенкса 3 раза. Внутриклеточные липиды экстрагировали смесью гексана и изопропанола 3:2 (объем/объем) по методу [4]. Содержание общего холестерина определяли с помощью набора фирмы «Boehringer Mannheim» (ФРГ), содержание клеточного белка — по методу Lowry [5].

Статистическая обработка проводилась непараметрическим методом одностороннего анализа вариант (ANOVA) с использованием пакета прикладных статистических программ «KwiKstat 2.10».

Результаты и их обсуждение

В таблице представлены данные о непосредственном влиянии препаратов сульфонилмочевины и их фармакопейных аналогов в концентрациях ЦТ^-3, 10“⁴, 10“⁵, 10“⁶ мг на 1 мл среды на содержание холестерина в культивируемых перитонеальных макрофагах мышей. Глибенкламид и его лекарственная форма манинил давали наибольший эффект в концентрации 1(Г³ мг/мл, при этом накопление холестерина составляло почти 50 % от исходного его содержания в клетках. Атерогенный эффект глибенкламида и манинила сохранялся при использовании концентрации 10^-5 мг/мл, в то время как при более низких исследованных концентрациях препаратов накопление внутриклеточного холестерина было недостоверным (см. таблицу).

Другой препарат из группы сульфонилмочевины — глипизид, как и его лекарственная форма — минидиаб, также вызывали в наивысшей исследованной концентрации 1,5-кратное достоверное увеличение содержания внутриклеточного холестерина; атерогенный эффект сохранялся вплоть до концентрации 10~⁵ мг/мл. Для всех исследованных препаратов отмечалась дозовая зависимость атерогенного эффекта (см. таблицу). До приема препарата у 1 больной отмечалась выраженная атерогенность сыворотки крови (содержание внутриклеточного холестерина возрастало более чем в 2 раза в культивируемых макрофагах мышей) и у 3 больных наблюдалась умеренная атерогенность (накопление холестерина составляло до 36 % от его содержания в контроле в культивируемых макрофагах мышей). У 2 больных сыворотки крови были исходно неатерогенны. На фоне приема препарата атерогенный потенциал сывороток крови повысился у всех больных, даже у тех из них, чьи сыворотки исходно обладали атерогенностью, т. е. накопление внутриклеточного холестерина, индуцированное сыворотками крови, увеличивалось. Следует отметить, что независимо от того, вызывали ли сыворотки накопление холестерина клетками до приема препаратов или нет, после приема атерогенность увеличивалась в одинаковой степени.

Атерогенный потенциал сыворотки крови больных ИНСД после однократного применения 5 мг манинила (а) и 5 мг минидиаба (б).

Исходная атерогенность сыворотки крови до приема препарата принята за 100%.

Звездочка — достоверное возрастание атерогенности сыворотки крови, р<0,05

Таким образом, пероральный прием препаратов сульфонилмочевины (манинила и мини- диаба) приводил к возрастанию атерогенного потенциала сывороток крови больных ИНСД.

На рисунке представлены данные о динамике атерогенности сыворотки крови под влиянием манинила и минидиаба. Как видно, пик атерогенности сыворотки крови после приема манинила развивался через 4 ч и к 10-му часу снижался до прежнего уровня. При приеме минидиаба пик атерогенности развивался через 2 ч и через 6 ч возвращался к прежнему уровню.

Прием препаратов сульфонилмочевины, по-видимому, может повышать риск развития атеросклероза у больных ИНСД, так как атерогенность сывороток крови больных после приема этих препаратов возрастает. Однако до сих пор не установлено, как влияют препараты сульфонилмочевины на развитие атеросклероза.

Нами обнаружено, что препараты сульфонилмочевины (глибенкламид и глипизид) и их фармакологические аналоги (манинил и минидиаб) непосредственно влияют на содержание холестерина в перитонеальных макрофагах мышей и, таким образом, проявляют атерогенное действие in vitro. Такой же эффект, по-видимому, проявляется и in vivo, поскольку сыворотки крови больных сахарным диабетом, исходно не обладавшие атерогенным потенциалом, становились атерогенными на фоне однократного приема препарата. Сыворотки крови больных, исходно обладавшие атерогенностью, проявляли усиленное атерогенное действие после приема сульфонилмочевины. Динамика атерогенности сыворотки крови больных на фоне приема препаратов сульфонилмочевины соответствует фармакокинетическим характеристикам данных препаратов. Так, максимальная концентрация манинила при приеме внутрь отмечается через 4—6 ч [6], пик повышения атерогенности при исследовании сыворотки также соответствует 4 ч. Максимальная же концентрация минидиаба достигается через 2 ч после приема препарата внутрь [7], пик повышения атерогенности также соответствует 2 ч.

Таким образом, препараты сульфонилмочевины — глибенкламид и глипизид — оказывают прямое атерогенное действие, которое требует дальнейшего исследования.

Вывод

Препараты сульфонилмочевины (глибенкламид и глипизид) и их фармакологические аналоги (манинил и минидиаб) дают прямой атерогенный эффект на культивируемых перитонеальных макрофагах мышей.