Сравнение двух методов определения аутоантител к антигенам ткани щитовидной железы

В сыворотках крови людей с нарушениями функции щитовидной железы часто обнаруживаются аутоантитела к органоспецифическим антигенам: тиреоглобулину (ТГ) и микросомальной фракции тиреоцитов (МСТ) |7]. Повышенный уровень аутоантител к ТГ встречается у 60-90% больных аутоиммунным тиреоидитом (АИТ), а к МСТ — у 80% больных базедовой болезнью и почти у 100% больных тиреоидитом Хашимото |6|. Присутствие аутоантител служит диагностическим признаком аутоиммунных заболеваний щитовидной железы, по своей природе они являются главным образом иммуноглобулинами класса G [8].

В настоящее время в практике отечественного здравоохранения для определения аутоантител к антигенам ткани щитовидной железы наиболее часто применяется реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) по Бойдену [3], в то время как более объективным и технологичным является метод иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием моноклональных антител (МКА), обеспечивающий высокую чувствительность и специфичность исследований [4].

Целью настоящего исследования было установление наличия или отсутствия корреляции между результатами, полученными при определении аутоантител к антигенам ткани щитовидной железы методом ИФА и РПГА.

Материалы и методы

Обследованы 62 пациентки в возрасте от 9 до 15 лет, проживающие в С.-Петербурге. Все обследованные были разделены на 2 группы: 1-я — 39 девочек-подростков с диффузным увеличением щитовидной железы, 2-я — 23 пациентки с АИТ, диагностика которого проводилась на основании клинических (плотная или неравномерно плотная консистенция щитовидной железы), иммунологических (определение титров аутоантител к антигенам ткани щитовидной железы) и ультрасонографических (типичная ультразвуковая картина АИТ) данных.

Уровень аутоантител к общему экстракту щитовидной железы определяли с помощью РПГА по общепринятой методике [3| в лаборатории эндокринного отделения городской детской больницы № 19. Аутоантитела к ТГ и МСТ определяли в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ Минздравмедпрома РФ методом непрямого-твердофазного ИФА [2]. МСТ была выделена в лаборатории из гомогената щитовидной железы человека, а твердофазный ИФА проводили в плоскодонных полистирольных планшетах (“Медпо- лимер”, С.-Петербург). На поверхность ячеек планшетов наносили раствор антигенов (ТГ или МСТ) в 0,1 М натрий- карбонат-бикарбонатном буфере (pH 9,5) в концентрации 5 мкг/мл и инкубировали в течение 18 ч при 4°С. Инкубация исследуемых сывороток с адсорбированным на твердой фазе антигеном продолжалась 1,5 ч при 37"С. В качестве выявляющих агентов использовали меченные пероксидазой из корней хрена МКА к иммуноглобулинам человека, полученные в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ [5]. ТГ был предоставлен НПО “Аллерген” (Ставрополь).

После каждой инкубации проводилось трехкратное отмывание от компонентов, не связавшихся с твердой фазой. Для отмывки и разведения реагентов использовали 0,01 М фосфатно-солевой буфер (pH 7,4), содержащий 0,15 М хлорида натрия и 0,05% твина-20. Наличие пероксидазной активности определяли по окрашиванию субстрат-хромогеппой смеси, содержащей 1 мг ортофенилендиамина в 1 мл 0.1 М натрий-цитратного буфера (pH 4,5) и 0,8 мкл 33% перекиси водорода. Оптическую плотность проб регистрировали при длине волны 450 нм на фотометре Multiscaii-MC. За нормальный принимали уровень аутоантител к ТГ и МСТ в Пуловой сыворотке от 300 штатных доноров НИИ гематологии и переливания крови Минздравмедрома РФ (С.-Петербург).

Статистическая обработка результатов исследования проводилась общепринятыми методами [1|. Для определения ошибок выборочных долей, сравнения средних величин и выборочных долей использовали /-критерий Сгьюдента.

Результаты и их обсуждение

Результаты исследования представлены в таблице.

При анализе результатов обращает на себя внимание относительное увеличение уровня аутоантител к антигенам ткани щитовидной железы при использовании ИФА. По мнению авторов, это связано с более высокой чувствительностью данного метода по сравнению с РПГА. Этот факт объясняется тем, что при использовании ИФА с антигеном (ТГ или МСТ) взаимодействуют и образуют иммунокомплекс два вида антител — аутоантитела из сыворотки крови человека и МКА к иммуноглобулинам человека, тогда как в случае использования РПГА сами аутоантитела являются агглютинирующим фактором.

Данные таблицы показывают, что в группе девочек-подростков с диффузным увеличением щитовидной железы средний уровень аутоантител к антигенам ткани щитовидной железы не отличается достоверно от нормы при определении как методом ИФА, так и РПГА.

Результаты определения уровня аутоантител к антигенам ткани щитовидной железы методом ИФА и РПГА

Примечание. Представлен средний уровень аутоантител (х). В скобках — число исследований, р — сравнение с нормой, pi — со 2-й группой.

В группе пациенток с диагнозом АИТ средний уровень аутоантител, определяемый методом ИФА, достоверно выше нормы (для аутоантител к ТГ — р < 0,001, для аутоантител к МСТ — р < 0,01). Средний уровень аутоантител, определяемый при помощи РПГА, в этой группе не отличается от нормы.

При сравнении средних величин уровня антител к антигенам ткани щитовидной железы в 1-й и 2-й группах установлено, что их значения достоверно выше в группе пациенток с диагнозом АИТ в сравнении с группой девочек-подростков с диффузным увеличением щитовидной железы при определении как методом ИФА (для аутоантител к ТГ — р < 0,001; для аутоантител к МСТ — р < 0,05), так и при помощи РПГА (р < 0,01).

Выявляемость повышенного уровня аутоантител в группе пациенток с диагнозом АИТ методом ИФА составляет 100 ± 0,0%, тогда как при помощи РПГА — 35 ± 9,9%. В 87 ± 6,0% случаев имеется соответствие определения уровня аутоантител к ТГ и МСТ, т.е. повышенному уровню аутоантител к ТГ соответствует повышенный уровень аутоантител к МСТ, а нормальному — нормальный.

Выводы

1. Выявляемость повышенного уровня аутоантител к антигенам ткани щитовидной железы достоверно (р < 0,01) выше при использовании ИФА.
2. Средние значения уровня аутоантител к ТГ и МСТ, определенные методом ИФА, достоверно (р < 0,001 и р < 0,01 для ТГ и МСТ соответственно) выше нормы в группе пациенток с диагнозом АИТ, а в группе девочек-подростков с диффузным увеличением щитовидной железы они не отличаются от нормального.