Гормональная чувствительность матки крыс после ее химической десимпатизации

В настоящее время не существует убедительных данных, свидетельствующих о существенной роли женских половых стероидов в генезе роста узлов при фибромиоме матки у женщин, так как во многих случаях при этом заболевании гормональный статус сохраняется неизмененным [6]. Не удается объяснить данный феномен и повышением концентрации рецепторов эстрадиола (Э2) в фиброматозных узлах, которая могла бы обеспечить возрастание чувствительности к этому гормону, стимулирующему ростовые процессы в матке [2, 4, 6]. Ранее мы обнаружили повышенное содержание рецепторов лишь в тех узлах, которые состоят преимущественно из миоцитов (миомы). В узлах, состоящих в основном из соединительнотканных элементов (фибромы), концентрация рецепторов Э2 оказалась, наоборот, сниженной [2]. Можно думать, что повышение чувствительности клеток фибромиомы к эстрогенам связано с прогрессирующей денервацией растущего узла [5]. Настоящее исследование предпринято с целью проверки этой гипотезы, учитывая то обстоятельство, что вопрос о взаимодействии катехоламинов (КА) и половых стероидов на уровне органов-мишеней до настоящего времени сравнительно мало изучен.

В качестве объекта исследования служила матка, которая, как известно, является мишенью для половых стероидов — Э2 и прогестерона (П). Десимпатизацию матки проводили путем внутри- маточного введения симпатолитика изобарина (гуанетидина), который, по данным литературы, резко снижает содержание КА в адренергических нервных окончаниях и клетках ганглиев [3, 8]. Для устранения эндогенного гормонального фона у крыс удаляли яичники за месяц до начала опытов. В качестве морфологических критериев действия Э2 и П на матку использовали число желез миометрия, высоту люминального эпителия и объем ядер миоцитов. Эти параметры сравнивали с показателями рецепции Э2 и П в цитозольной и ядерно-миофибрил- лярной фракциях матки.

Материалы и методы

Использовали взрослых беспородных самок крыс. Двустороннюю овариэктомию производили под эфирным наркозом. Изобарин вводили ненаркотизированным крысам через цервикальный канал с помощью притупленной иглы от шприца «Рекорд». Цервикальный канал расширяли мандреном. Препарат вводили трижды в дозе 17 мг в 0,08 мл НС1, нейтрализованной карбонатом натрия. Первое введение осуществляли спустя месяц после овариэктомии, второе — на следующий день, третье — через неделю после второго введения. Животных забивали через 2 нед после последнего введения изобарина.

Гормоны вводили внутримышечно в течение 10 дней, начиная сразу после окончания введения изобарина и заканчивая за 24 ч до забоя. Масляный 0,1 % раствор дипропионата Э2 вводили в дозе 1 мкг/животное, а 1 % масляный раствор Г1 — в дозе 1 мг/животное.

После декапитации животных матки извлекали, промы - вали в физиологическом растворе и гомогенизировали на холоду в 10 объемах ТЭМД-буфера (трис-НС1 — 5 мМ, ЭДТА—1 мМ, NaMoO₄—10 мМ, дитиотреитол — 5 мМ). Изучение рецепции проводили по методике, подробно описанной в наших предыдущих работах [1, 6, 7]. Белок определяли по методу Брэдфорд.

Концентрацию норадреналина в матке определяли радио- ферментным методом с помощью стандартного набора «КАТЕХОЛА» фирмы «ХЕМОПОЛ» (ЧСФР), согласно инструкции, приложенной к набору.

Для приготовления гистологических препаратов кусочки матки фиксировали в формалине, проводили через спирты по обычной схеме, заливали в парафин и готовили микротомные срезы толщиной 4—5 мкм. Окрашивали гематоксилином и эозином и по методу Ван-Гизона. Высоту люминального эпителия определяли с помощью окуляр-микрометра на поперечных срезах матки. Объем ядер миоцитов циркуляторного слоя миометрия определяли посредством окуляр- микрометра, измеряя продольный (1\) и поперечный (/г) диаметры ядер при увеличении 1:900, и вычисляли их объем по формуле для эллиптического тела вращения: У=

Л• /| •/1

= 6 '

Данные обрабатывали статистически, используя критерии Фишера — Стьюдента и непараметрические методы.

Результаты и их обсуждение

Внутриматочное введение изобарина овариэкто- мированным животным приводило к снижению содержания норадреналина в этом органе в среднем на 40 % (от 253,6±63,7 до 151,5+46,8 нг/г). Масса матки при этом не изменялась.

Из таблицы видно, что само по себе введение изобарина не сказывается на изученных нами морфологических показателях. Однако хроническое- введение Э2 на фоне химической десимпатиза- ции в значительно меньшей степени увеличивает высоту люминального эпителия и объем ядер миоцитов, чем у соответствующей контрольной группы животных. Общее число желез эндометрия у крыс под действием Э2 возрастало примерно в равной мере независимо от введения изобарина.

Действие хронического введения П на фоне введения изобарина также проявлялось в гораздо меньшей степени в отношении высоты люминального эпителия и числа желез эндометрия, но не объема ядер миоцитов (см. таблицу).

Морфологические показатели утеротропного действия Эг и П у овариэктомированных (ОЭ) крыс с химической десимпатизацией матки

Примечание. Звездочками отмечены достоверные (р<0,001) отличия от показателей 1-й группы (одна звездочка), 3-й группы (две звездочки), 4-й группы (три звездочки).

Таким образом, можно считать, что ослабление симпатического влияния на матку приводит к значительному снижению чувствительности этого органа к Э₂ и П, судя по морфологическим критериям.

Введение изобарина не сказывается на уровне рецепторов половых гормонов ни в ядерной, ни в цитозольной фракциях. Так, у овариэктомированных крыс уровень рецепторов Э₂ (в нмоль на матку) в цитозоле составил 1,86+0,81, на фоне введения изобарина — 2,16+0,13, а в ядрах — соответственно 0,26+0,13 и 0,13+0,04. Общее содержание рецепторов П в цитозоле матки этих животных составляло 0,62+0,09, при введении изобарина — 0,76+0,08, а в ядрах — соответственно 0,08+0,05 и 0,12+0,04. Все эти изменения не были статистически достоверными.

На рисунке представлены данные об изменениях уровня рецепторов женских половых стероидов в матке овариэктомированных крыс с химической десимпатизацией под влиянием введения Э₂ и П. Концентрация ядерных рецепторов Э₂ и П под влиянием половых гормонов у десимпатизированных самок крыс возрастала в гораздо большей степени, чем у соответствующих контрольных животных (см. рисунок, а). Эти различия проявлялись еще ярче при оценке общего содержания рецепторов в матке с учетом массы органа и содержания в нем растворимого белка (см. рисунок, б). Причем у десимпатизированных животных при хроническом введении Э₂ и П возрастало содержание не только гомологичных, но и гетерологичных рецепторов в ядерной фракции,в то время как в цитозольной фракции достоверных отличий не наблюдалось.

Учитывая выявленное снижение чувствительности тканей матки к экзогенным Э₂ и П по морфологическим параметрам, эти изменения мы склонны трактовать как нарушения рецепции данных гормонов, вызванные снижением уровня КА в матке.

В литературе имеются многочисленные данные о том, что синтетические аналоги Э₂, такие как кломифен, тамоксифен и т. п., вызывают значительное повышение концентрации ядерных рецепторов Э₂, но не имитируют его специфических биологических эффектов в матке [11, 12]. Сходную картину мы обнаружили и в наших экспериментах. Возможно, что в основе антиэстро- генного действия синтетических антиэстрогенов и выявленных нами нарушений чувствительности к половым гормонам у самок крыс с химической десимпатизацией матки лежат одни и те же механизмы, а именно — нарушения рецепторного цикла. Как известно, восстановление рецепторов половых стероидов после отщепления от них связанного гормона в форму, способную вновь присоединять соответствующий гормон, так называемый рециклинг рецепторов, является очень сложным процессом. Он осуществляется с помощью специфических ферментов и требует энергии АТФ, а также зависит от концентрации цАМФ и ионов молибдата [9, 10]. Возможно, что цАМФ, концентрация которого возрастает при действии КА на клетки матки, участвует также в рециклинге рецепторов Э₂ и П, а вызванное изобарином снижение концентрации КА приводит к снижению уровня цАМФ, что в свою очередь приводит к блокированию перехода рецепторов стероидных гормонов из ядра в цитоплазму для связывания новой порции гормона и в результате — к снижению чувствительности матки к соответствующим гормонам. Эта гипотеза хорошо объясняет странный на первый взгляд факт — повышение общего количества рецепторов Э2 в ядрах при введении П и общего количества ядерных рецепторов П при введении Э2 десим- патизированным крысам.

Изменение содержания рецепторов Эг (/) и П (2) (в фмоль на I мг белка — а и нмоль на матку — 6) в цитозольной (Ц) и ядерной (Я) фракциях матки овариэктомированных крыс с химической десимпатизацией матки при хроническом введении одноименных гормонов.

По вертикали — изменение концентрации рецепторов (в % от контроля). Светлые прямоугольники — овариэктомированные крысы, заштрихованные — овариэктомированные крысы с введением изобарина. Звездочка — различия между показателями контрольных и десимпатизированных животных статистически достоверны.

Однако предложенный механизм взаимосвязи КА и рецепторов женских половых стероидов в матке является чисто гипотетическим. Полученные нами данные не позволяют исключить и другие возможные механизмы, не связанные с рецепторным циклом.

В целом представленные данные- свидетельствуют о том, что КА и женские половые стероиды являются синергистами в действии на клетки матки и что КА необходимы для нормального функционирования ее рецепторного аппарата.

Таким образом, исходная гипотеза о причинах роста фиброматозных узлов, основанная на факте отсутствия в' них норадренергических нервных окончаний [5, 8], представленными экспериментальными данными не подтвердилась, и вопрос о причинах роста фиброматозных узлов остается нерешенным.

Выводы

1. Ослабление симпатического влияния на матку крыс приводит к значительному снижению чувствительности этого органа к Э2 и П, оцененной по морфологическим критериям.
2. Хроническое введение Э2 и П десимпатизи- рованным овариэктомированным животным приводит к резкому возрастанию общего количества как гомологичных, так и гетерологичных рецепторов в ядерной фракции матки.
3. КА являются синергистами женских половых стероидов в действии на клетки матки и необходимы для нормального функционирования ее рецепторного аппарата.