Влияние женских половых стероидов на способность спленоцитов формировать адоптивный иммунный ответ. Роль простагландина в механизмах гормональной иммунорегуляции

Механизмы специфической толерантности, развивающейся к антигенам плаценты и плода при физиологической беременности, до сих пор не выяснены. Между тем концепция нейроэндокринного контроля иммунной системы получает новые экспериментальные и клинические подтверждения [3, 11 ]. Эндокринный статус беременной женщины существенно отличается от такового у небеременной, уровень гормонов репродукции и их соотношение значительно меняются в разные триместры, что, по-видимому, важно для процессов роста и дифференцировки фетальных клеток.

В период беременности половые стероидные гормоны являются ее мощными протекторами не только благодаря контролю за процессами роста репродуктивных органов и тканей, но и вследствие непосредственного влияния на иммунокомпетентные клетки матери [4—6, 13]. Этому способствует высокий уровень половых стероидных гормонов во время беременности, превышающий на несколько порядков максимальные концентрации у фертильных небеременных женщин [9]. Известно, что эстрадиол (Е₂) и прогестерон (Г1) обладают разнообразными иммуномодулирующими эффектами, и это разнообразие зависит от их концентрации, степени активности лимфоцитов, а также длительности воздействия гормонов на иммунокомпетентные клетки [4].

Целью настоящей работы было изучение иммуномодулирующих эффектов Е₂ и П в концентрациях, характерных для беременности, а также влияния этих гормонов на продукцию простагландина F_2a (ПГБ_2о) иммунокомпетентными клетками на этапе антигеннезависимой дифференцировки.

Материалы и методы

Работа выполнена на мышах-самках линии СВА массой 20—22 г, полученных из питомника лабораторных животных РАМН «Рапполово». Асептически выделенные интактные клетки селезенки культивировали в 4 мл питательной среды 199 (5-Ю⁶ клеток в 1 мл) при 37 °C в течение 1 ч. В опытные культуры клеток вносили Е₂ (1 или 10 нг/мл) или П (20 или 100 нг/мл) фирмы <Serva>. Дозы половых стероидов соответствуют среднему уровню этих гормонов в I и III триместрах беременности у женщин [9]. В контрольные флаконы вносили растворитель гормонов — этанол (0,25 % раствор на среде 199). Параллельно ставили контроль без растворителя гормонов. После часовой инкубации клетки отмывали холодной средой 199 и концентрировали таким образом, чтобы в 0,5 мл суспензии содержалось 2-Ю⁷ спленоцитов. Затем 2-10⁷ клеток совместно с 2-10® эритроцитами барана в общем объеме 0,7 мл переносили внутривенно сингенным, летально облученным (219,3 мКл/кг) реципиентам. На 4-й день от сингенного переноса мышей-реципиентов забивали и в селезенке определяли количество антителообразующих клеток (АОК) ме-

Зависимость концентрации nrF_2a от качественного состава интактных клеток селезенки.

По вертикали: концентрация ПГр2_а (в пг/0,1 мл); по горизонтали: / — контроль; 2 — спленоциты, лишенные адгезивных клеток (макрофагов); 3 — спленоциты, элюированные с колонки нейлоновой ваты (Т-лимфоциты), Р|_₂< <0,001; р₁_₃<0,01.

тодом локального гемолиза в геле агарозы [7]. В других экспериментах, после часового инкубирования клеток селезенки с половыми стероидами, брали по 0,1 мл супернатанта и определяли концентрацию простагландина nTF_2a радиоим- мунологическим методом. Для этого использовали стандартный КИТ РИА ³H-nrF_2o (Директ; Институт изотопов, Будапешт, Венгрия).

В некоторых сериях экспериментов клетки селезенки фракционировали. Макрофаги удаляли методом активной адгезии на стекле [2], Т-лимфоциты получали элюируя спленоциты с колонки найлоновой ваты [8].

Жизнеспособность клеток после часового культивирования по тесту с трипановым синим в среднем составила 98 %.

Результаты обрабатывали с помощью критерия Стьюдента, для АОК использовали десятичный логарифм натуральных чисел, поскольку их распределение при генерации log-зависимо.

Результаты и их обсуждение

Часовая инкубация нефракционированных спленоцитов с Ег в концентрации, которая обычно бывает на 8-й неделе беременности (1 нг/мл), не оказывает существенного влияния на процессы формирования АОК, в то время как в концентрации, характерной для 30-й недели беременности (10 нг/мл), Е₂ оказывает статистически достоверное иммуностимулирующее действие (табл. 1). П в концентрациях, характерных как для 8-й (20 нг/мл), так и для 30-й (100 нг/мл) недели беременности, активирует процессы антигеннеза- висимой дифференцировки иммунокомпетентных клеток, что приводит к статистически достоверному повышению числа АОК (см. табл. 1). Статистически значимой разницы между эффектами высоких и низких доз Ег или П не обнаружено, что говорит о перманентном иммуностимулирующем действии половых стероидных гормонов в течение всего периода беременности. Однако необходимо подчеркнуть, что речь идет только о гуморальном иммунном ответе, а иммуностимулирующее действие половых стероидов реализуется на уровне лимфоцитов, которые еще не контактировали с антигеном.

Известно, что ПГЕ_2а оказывает выраженное потенцирующее действие на процессы антителооб- разования [1]. Этот класс ПГ практически не охарактеризован с позиции регуляции иммуногенеза, в отличие от ПГЕг—иммуносупрессора гуморальных и клеточно-опосредованных реакций [10, 15]. Антагонизм эффектов этих ПГ объясняют тем, что ПГЕг реализует свое действие через цАМФ, а ПГЕ_2а — через цГМФ [12]. Поскольку ПГЕг и ПГЕ_2а синтезируются из единого предшественника— ПГН₂ [9], можно предполагать ре- ципрокность механизма их синтеза иммунокомпетентными клетками.

Как видно из табл. 2, при часовой инкубации Ег или П с клетками нефракциониро- ванной селезенки происходит статистически значимое увеличение концентрации nTF_2a в супернатантах этих клеток. Характерно, что этот процесс не зависит от вида полового стероидного гормона и его концентрации.

Таким образом, иммуностимулирующий эффект Ег и П в концентрациях, характерных для беременности, сопровождается усилением продукции nrF_2a спленоцитами. Не исключено, что усиление продукции nrF_2a лимфоидными клетками селезенки является сигналом, активирующим процессы дифференцировки иммунокомпетентных клеток, рецептирующих женские половые стероиды.

Учитывая, что продукция nTF_2a прямо связана с Т-лимфоцитами [14], нами были проведены дополнительные исследования на фракционированных клетках селезенки. На рисунке видно, что спленоциты, лишенные прилипающих клеток — основных продуцентов ПГЕг [1], резко активируют продукцию nrF_2a. Суспензия Т-клеток, элюированная с колонки нейлоновой ваты, продуци-. рует сходные количества nrF_2o, что однозначно указывает на Т-лимфоцитарную природу nTF_2a и в

Таблица 1

Уровень адоптивного иммунного ответа при часовом воздействии женских половых гормонов на клетки селезенки

Примечание, п — число животных в группе; в скобках — натуральные значения АОК.

Таблица 2

Концентрация ПГБ_2а в супернатантах спленоцитов на фоне часового воздействия женских половых стероидов

Примечание, т — число проб в группе.

то же время подтверждает наше предположение о реципрокности синтеза ПГ разного класса. Однако механизм такого действия работает не на уровне одной клетки, а на уровне популяций клеточного сообщества. Можно считать, что макрофаги, обладающие адгезивностью и продуцирующие преимущественно ПГЕг, сдерживают продукцию ПГЕ_2о Т-лимфоцитами, с высоким уровнем которого связаны иммуностимулирующие эффекты женских половых гормонов. По-видимому, в период беременности половые стероиды активируют процессы продукции ПГЕ_2а Т-лимфоцитами либо непосредственно, либо опосредованно, ингибируя активность макрофагов. Результатом этого действия является активация процессов антигеннеза- висимой дифференцировки клеток, формирующих гуморальный иммунный ответ.

Выводы

1. Ег в концентрации, характерной для I триместра (1 нг/мл), увеличивает продукцию ПГР_2а интактными спленоцитами, а в концентрации 10 нг/мл (III триместр) одновременно с активацией синтеза ПГР2_а статистически значимо увеличивает число АОК в селезенке.
2. П в концентрациях 20 или 100 нг/мл, которые отражают его уровень на период I и III триместров беременности соответственно, увеличивает количество АОК и уровень ПГЕ2а, продуцируемый иммуноцитами.

Продукция ПГР2а связана с Т-лимфоцитами. Адгезивные клетки сдерживают эту продукцию.